06第六讲分子光谱技术概述.pptVIP

第六讲 分子光谱技术 内容 紫外可见光谱 荧光光谱 圆二色光谱(5min 简单介绍) 教学方式 提问—讨论的方式进行讲解 电磁波谱 核磁共振、微波波谱 顺磁共振、 远红外光谱、红外光谱 激光拉曼光谱、可见光谱、紫外光谱、x－射线谱、穆斯堡尔谱、γ-谱仪 光的特性 波动性 A： 振幅 f： 震动频率（周/秒－c/s 、Hz） λ：波长（长度单位） τ： 周期（s/c） τ＝1/ν ν ：波数：每一厘米距离中通过波的数量（ 1/λ） ν= c/ λ c = 3.0×108 m/s ＝ 3.0×1010 cm/s 粒子性 移动的粒子、能量子、光量子、光子 二相性 E＝h · f＝ h · c / λ= h · c · f h＝6.026×10-34(J·s)=6.026×10-27(erg·s) 分子光谱 分子光谱 电磁波与物质分子相互作用 物质分子吸收或发射一定波长的电磁波 产生相应的吸收光谱或发射光谱 电磁波谱由分子价电子产生的~称为分子光谱 分子光谱与分子结构有着密切的关系 物质结构的信息－－定性分析 强度与物质含量有密切关系－－定量分析 分子光谱分类（电子的跃迁、转动、振动） 紫外—可见—近红外吸收光谱 (电子光谱) 分子荧光光谱、磷光光谱 红外光谱（吸收光谱）（转动和振动） 分子光谱形成的机理 激发光谱与荧光光谱 ——如何获得？ 荧光强度与物质浓度的关系曲线 ? 最佳实验条件和最佳仪器条件下，铽离子浓度在1×10-8 mol·L-1到1×10-5 mol·L-1范围内与EHPG与Tb3+在547nm处的荧光强度成线性关系。 ? 最低检出限为 0.0526 ×10-8 mol·L-1 。 仪器及原理 比尔－朗伯特（Beer-Lambert)定律 吸光度和物质的定量关系 A= log(I0/I) = a·b·c= - log(I/I0) = - logT T = I/I0 a=A/(b·c) （a：吸光系数） A=εb c （ε：摩尔吸光系数） 小结 吸收光谱仪器的工作原理 比尔－朗伯特（Beer-Lambert)定律 A=ε b c （ε：摩尔吸光系数） 影响Beer-Lambert Low偏离的因素 F-4500 荧光分光光谱仪（日本 Hitachi） 荧光分光光谱仪 工作原理：光源的激发光照射到样品池中，激发样品中的荧光物质发出荧光，被光电倍增管接受，最后以图或数字的形式显示出来。 光源：高压汞灯或氙灯，在190nm-800nm范围，发射强度较大的连续光谱。 激发单色器：置于光源和样品室之间的单色器（第一单色器） 发射单色器：置于样品室和检测器之间的为单色器（第二单色器。 样品室：石英池(液体样品用)或固体样品架(粉末或片状样品)组成。光源与检测器成直角安排，测量固体时，光源与检测器成直角。 检测器：一般用光电管或光电倍增管。可将光信号放大并转为电信号。 其它附属设施 控温系统和装置 停留装置 固体样品架 荧光光谱 激发光谱 a 发射光谱 b 问题：激发光谱和吸收光谱有何不同？ 激发光谱与荧光光谱 荧光强度与物质浓度的关系曲线 ? 最佳实验条件和最佳仪器条件下，铽离子浓度在1×10-8 mol·L-1到1×10-5 mol·L-1范围内与EHPG与Tb3+在547nm处的荧光强度成线性关系。 ? 最低检出限为 0.0526 ×10-8 mol·L-1 。 仪器功能 VU—Vis仪 光谱扫描（吸收、透光率、能量） 固定波长测定 时间扫描 拟合运算功能 输出（强大的Excel 表格输出） 液体样品 在蛋白质分析中的应用 基本原理： 物质定性定量分析 特征光谱 （光谱图、峰位置） A=εb c F＝K c 物质之间相互作用（光谱信号） P+Q=P-Q K=[P-Q]/[P][Q] F0/F=1+K[Q] 紫外-荧光光谱仪器及光谱检测器： 紫外可见光谱仪、荧光光谱仪器、时间分辩荧光光谱仪、红外光谱仪、ORD、CD光谱仪器、核酸蛋白质检测、凝胶观察、流式细胞分析、荧光共聚焦显微镜、荧光显微镜、光密度显微镜、实时荧光定量PCR分析等等 紫外、可见光谱仪的应用 可广泛用于医学卫生、临床检测、生物化学、石油化工、环保检测、质量控制等方面作定量、定性分析。 多糖、蛋白、核酸等多种物质定性、定量测量。 紫外可见近红外分光光度计还可以测量近红外区的固体、液