第三章第三节园艺植物的离体快繁.ppt

马铃薯的脱毒与快繁 马铃薯病毒的种类 1．脱毒种薯生产程序 2．茎尖培养脱毒 （4） 继代和生根 (5) 驯化 （三）、马铃薯无病毒苗的鉴定 （四）、马铃薯无病毒株的繁殖 * 第三节 园艺植物的离体快速繁殖 离体快繁是指通过无菌操作，将外植体接种于培养基上，在人工控制的营养和环境条件下进行培养，使其在较短的时间内快速地再生出大量完整植株的方法。是工厂化育苗的技术基础。 一、离体快速繁殖的意义： 1. 可用于繁殖稀缺或急需的良种作物，如新选育或新引进的优良品种由于数量少而急需大量种苗时，可以采用组织培养的方法繁殖。如香蕉、苹果、马铃薯等。 2. 离体快速繁殖可用于无病毒苗木的快速繁殖，利用茎尖分生组织培养并检测无病毒后进行离体快繁，可以获得大量的无病毒苗木。草莓、柑橘、球根花卉等。 3. 离体快速繁殖可以用于自然界无法用种子繁殖或难以保持后代的三倍体、单倍体及基因工程植株的快速繁殖，如无子西瓜、石刁柏雄株。 4. 离体快速繁殖技术可以用于拯救濒危植物，可以避免灭绝。 5. 离体快繁可以用于种质保存与交换。 二、离体快繁的方法： （一）无菌培养体系的建立： 母株和外植体的选取 尽管所有组织和器官均可作为外植体，但具体采用何种组织或器官快繁因植物种类而有所不同，通常木本植物、较大的草本植物采用茎尖、茎段或腋芽作为快繁的外植体，草本植物或茎短缩的类型，可以采用叶片、叶柄、花瓣、花梗等外植体。 2. 无菌培养物的获得 选取幼嫩、生活力强的外植体，保持新鲜，迅速带回实验室，流水冲洗后在超净工作台上表面灭菌，然后接种于诱导培养基上。 3. 外植体的启动培养 细胞分裂素和生长素浓度最为重要，细胞分裂素通常0.5-1.0mg/L，生长素0.01-0.1mg/L;诱导不定芽分化是采用高浓度细胞分裂素，诱导愈伤组织时需提高生长素浓度并添加一定浓度的细胞分裂素。 （二）茎芽增殖的途径： 1.茎芽增殖的途径 （1）侧芽增殖途径：指利用茎尖及侧芽培养直接获得芽苗或丛生芽的方法。通过添加细胞分裂素促进侧芽萌发而形成丛生芽。 （2）不定芽途径：除了利用顶芽和侧芽等固定芽之外，由根、茎、叶等外植体直接或经脱分化形成愈伤组织后再分化不定芽的过程进行增殖。 （3）体细胞胚途径：由外植体直接或间接（先形成愈伤组织）形成胚状体的途径进行快速繁殖。如百合鳞片可直接形成胚状体；胡萝卜、芹菜先形成愈伤组织，然后形成胚状体。 （4）原球茎途径：兰科花卉的种子萌发形成原球茎，由茎尖、叶片等外植体可诱导形成类原球茎，并可快速增殖。 大花蕙兰原球茎增殖与植株再生 2. 影响茎芽增殖的因素： （1）植物种类：草本植物速度快，木本植物增殖慢。 （2）外植体的生理状态：生长旺盛组织增殖快。 （3）表面灭菌时的受伤害程度: 表面灭菌剂对外植体伤害轻，启动快，伤害重，启动慢。 （4）培养基组成及激素配比: 选择适宜的基本培养基，草本植物选用MS等，木本植物选用WPM等培养基。激素和生长调节剂浓度比例需注意在不同培养阶段进行合理使用。 三、离体快繁中常见的问题： （一）污染 污染发生的原因： （1）培养基和接种用具灭菌不彻底；（2）外植体灭菌不彻底；（3）操作时人为带入；（4）接种室环境不洁净；（5）超净工作区域不洁净。 2. 控制污染的措施： （1）灭菌时充分排净锅内冷空气；（2）接种器具充分灼烧；（3）污染外植体及时挑出，灭菌后倒掉。外植体材料少可二次处理；（4）接种时用75%乙醇擦拭双手和培养容器，操作区不放置过多的培养容器； (5) 接种室定期熏蒸或消毒液处理；并采用紫外灯进行空气杀菌；（6）超净工作台定期清洗过滤网。 （二）遗传稳定性 影响遗传稳定性的因素： （1）基因型；（2）继代次数；如香蕉继代不超过1年。 （3）器官发生方式；茎尖茎段培养较稳定。 2. 降低遗传变异的措施： （1）选用不易变异的基因型； （2）缩短继代时间、限制继代次数，继代一定时间后，重新建立无性系； （3）采用不易变异的途径增殖； （4）采用适当的激素和生长调节剂。 （三）玻璃化 玻璃化苗发生的原因： （1）琼脂和蔗糖浓度与玻璃化呈负相关； （2）培养温度过高；（3）生长调节剂浓度过高，如细胞分裂素过高；（4）培养瓶乙烯浓度过高；（5）光照过强或与高温同时作用；（6）培养基含氮量高，尤其是銨态氮。 2. 防治玻璃化的措施： （1）提高培养基硬度；（2）提高培养基蔗糖含量或加入渗透剂；（3）选用透气瓶盖改善通气状况；（4）降低生长调节剂和含氮化合物的浓度；（5）适当降低温度；（6）一些添加物或抗生素可降低玻璃化，如马铃薯汁、活性炭、PP333，CCC等。 （四）褐化现象： 影响褐化发生的因素： （1）植物种类和基因型，如木本植物褐化严重；（