BRSF 4B8真空紫外(VUV)站圆二色谱操作规程.docx

BRSF 4B8真空紫外（VUV）站圆二色谱实验流程一、圆二色谱的基本原理一束平面偏振光的左旋圆偏光和右旋圆偏光在具有光学活性介质中的传播速度不同，而且吸收也不相同，通过介质后平面偏振光成为椭圆偏振光，这种现象称之为圆二色性。 圆二色谱是一种特殊的吸收谱，它对手性分子的构象十分敏感，是研究分子手性结构的快速、简单、准确的分析方法，可以提供检测物质丰富的分子结构信息。普通商用圆二色谱仪用氙灯做光源，氙灯200 nm以下波段的光强度弱且噪声大，很难得到准确且信噪比好的谱。由于同步辐射光强度高，用同步辐射光源做光源的圆二色谱仪可以测得较好的谱。北京同步辐射BSRF 4B8真空紫外站提供120-350 nm波段的光，可以进行温度范围4℃—90℃的圆二色谱测试。样品处的光通量为1.0×109/s，光斑大小2 × 1 mm2。一般水体系可以测到175-180 nm左右。二、样品制备实验站提供不同光程的样品池（0.01, 0.1, 0.2, 1 ，单位mm），和相应的样品池架。尤其短光程样品池是精密光学器件，装样和清洗时，务必注意保护，避免刮伤、摔坏；样品池通常由两 片石英玻璃组成，由于外径一样，注意不要和其 他样品池弄混，因为每个样品池的这一对石英玻璃是进过专门的偏振校正。1mm cell及cell holder0.01，0.1，0.2mm 石英cell，0.01，0.05，0.09 mm CaF2 cell，及cell holder石英圆片样品池标有两个蓝点的为装样片，一个蓝点的为盖片；装入样品后，蓝色标记均冲外侧。放盖片时，蓝点对应装样片两个蓝点中间。样品池放入样品架时，盖片蓝点对应样品架外侧凹槽。CaF2样品池没有蓝点标记，有缺口标记，装样品时仔细将缺口对准，放入样品架时同样将缺口对准样品架外侧凹槽。装样注意务必防止气泡，否则测试结果无效；新手先用去离子水先练习装样，直到没有气泡。装样的一致性对于取得可靠和可重复数据非常重要，cell方向一致，cell holder方向一致，所用操作，除了样品不同外，相对位置均要相同，这样才能保证重复性。样品制备要同时考虑样品浓度、样品池、溶剂或缓冲液三方面的因素。吸收值在0.6~1.2之间能获得好的信噪比，若吸收值超过2，则数据变得不可靠。样品浓度保证样品的纯度和透明度前提下，样品浓度越大，吸光度越大，样品左旋和右旋圆偏振光的吸收表现出来的差异越大，检测灵敏度越高，信噪比也越高。但是浓度大，会导致远紫外区的光全部被样品吸收，无法得到样品自身在短波处的吸收信息样品池的选择选择样品池的原则：1.尽量选择短光程的样品池，减小溶剂吸收，得到信噪比较好的谱。但要光程短需要样品浓度加大，需要注意样品浓度过大时可能吸收过高，使PMT高压超限，谱图失真。2. 1 mm以上一般石英池，1mm以下有石英池和CaF2池两种。CaF2池制样不易产生气泡，且200nm以下波段能获得较好的信噪比。1 mm石英池样品量需要200μL左右， 0.09mm的CaF2样品池，上样量在45μL左右。然后将样品池放入检测器内，确保每次的位置都一样。溶剂/缓冲液的选择选择在紫外区对光吸收小的缓冲液，NaCl对近紫外光有较强的吸收，缓冲溶液的选择不要引入Cl-。 不同溶剂紫外区吸收及截止波长表由于大气中的氧气在200nm以下对光线有很强的吸收, 所以实验应在真空中进行,或整个仪器光路都充以氮气。另外, 在190nm以下溶剂对光线的吸收很大, 为了得到较高的信噪比, 以获得好的圆二色谱, 应采用尽量短的光程，使溶剂对光的吸收尽可能少。为了提高信噪比,当样品的CD谱不是很尖锐时,可适当增大狭缝宽度,增大积分时间、降低扫速, 这样可以获得较光滑的谱, 而又不影响实验结果。三、实验站操作流程计算机密码：vuv常规圆二色谱：双击桌面上的软件“CD_Rregular Sca；变温圆二色：双击桌面上的软件“CD_Themal Sca。输入起始流强（束流负电子强度），根据实验站当时情况设置参数（因为每次实验参数不一样，此处如需要操作需实验站人员帮助）。设置参数 波长范围：以扫描180-350 nm为例，根据需要选择。 Start：350 nmEnd：180 nmStep：一般用1.0 nm Scan times：3（根据采集的数据质量决定，信噪比好的可以减少扫描次数，信噪比差的可以多扫几遍） Temp：25℃ Flush time（min）：0.1(此项为预通氮气的时间)Pathlength：0.1 cm（此项会在保存的txt文件中记录，也可不填，但要做好实验记录）操作注意事项：1. 装样注意务必防止气泡，保持一致性，不要弄混样品池。。2.装样品时调整垫圈的个数，使样品池松紧适度地固定在样品池架内。 3.测试时盖