1真核细胞DNA提取解读.pptVIP

真核细胞DNA的提取 二、实验原理： 　　 　　核酸分子是基因工程研究的主要对象。核酸样品的质量直接关系到基因研究一系列试验的成败。 　　核酸包括脱氧核糖核酸DNA 和核糖核酸RNA 两种分子。 在生物体中核酸常与蛋白质结合在一起，以核蛋白的形式存在。由于，脱氧核糖核蛋白与核糖核蛋白在电解质溶液中溶解度明显不同，据此可将二者分离。 植物细胞经过充分冷冻，细胞核在研磨时容易破裂，利于提取ＤＮＡ．ＤＮＡ在低温下易于凝集。　　植物总 DNA 的抽提常采用两种方法： SDS 法和 CTAB 法。 CTAB 法：简便、快速， DNA 产量高，但纯度稍次，适用于一般分子生物学操作。 CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）是一种非离子去污剂，植物材料在 CTAB 的处理下，结合 65℃ 水浴使细胞裂解、蛋白质变性、 DNA 被释放出来。 CTAB 与核酸形成复合物，此复合物在高盐（ 0.7mM ）浓度下可溶，并稳定存在，但在低盐浓度（ 0.1 ～ 0.5mM NaCl ）下， CTAB- 核酸复合物就因溶解度降低而沉淀，而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中。经离心弃上清后， CTAB- 核酸复合物再用 70 ％ ～ 75% 酒精浸泡可洗脱掉 CTAB 。再经过氯仿 / 异戊醇（ 24:1 ）抽提去除蛋白质、多糖、色素等来纯化 DNA ，最后经异丙醇或乙醇等 DNA 沉淀剂将 DNA 沉