1.无菌操作与细胞复苏要点.pptVIP

其他培养用液 １、消化液 　（1）胰酶(trypsin)溶液： 浓度一般为0.1％～0.25％ 配制时要用不含Ca2+、Mg2+及血清的平衡盐溶液 　 　 （2）EDTA溶液： 使用浓度为0.02%；可与胰酶的混合使用 　 　　 一种化学螯合剂，对细胞有一定的离散作用，而且毒性小，价格低廉，使用方便 常用工作液浓度为0.02%。注意：使用EDTA 处理细胞后，要用平衡盐液冲洗干净，因残留的EDTA 会影响细胞生长 EDTA 溶液配制：用D-Hanks’ 平衡盐溶液溶解后，高压蒸汽灭菌，分装成小瓶，4℃冰箱保存 （3）胶原酶(collagenase)溶液： 使用浓度为0.1～0.3mg／L或200000U／L， 作用的最佳pH为6.5。胶原酶不受Ca2+、 Mg2+及血清的抑制，配制时可用PBS。 胶原酶作用温和，不易对细胞产生损伤。 在上皮类细胞原代培养时经常使用 缺点：价格昂贵 ２、谷氨酰胺补充液 　　合成培养基中必需成分，但容易降解，所以 都是在使用前添加。 　　谷氨酰胺使用终浓度为0.002mol/L。一般配 制为100倍浓缩液，配制时应加温至30℃，完全 溶解后过滤除菌，分装至小瓶，储存于-20℃。 3、pH调整液 　 常用的有 HEPES液 　　　　　 NaHC03 NaHCO3 溶液