实验五：基本接种方法与主要微生物菌落形态的观察.docxVIP

《微 生 物 学》实验报告开课时间室：A区文科楼510 2012年11月29日学院生物工程学院年级、专业、班10级生工01班姓名吕亚慧成绩课程名称微生物学实验实验名称基本接种方法与主要微生物菌落形态的观察指导教师李苹教师评语教师签字：年 月 日实验目的：学习接种的各种方法观察主要微生物菌落的形态比较细菌、真菌和放线菌的菌落形态实验原理接种即按无菌操作技术要求将目的微生物移接到培养基质中的过程，接种细菌应用接种针（环）来沾取细菌标本，进行接种。一般用右手持笔式较为方便，左手可持培养基进行配合，其接种程序可分为：灭菌接种环→稍冷→沾取细菌样品→进行接种（包括：启盖或塞、接种划线、加盖或塞）→进行接种环灭菌等五个程序。不同培养基，接种方法也不同。接种常见方法有：平板划线接种法、斜面接种法、倾注培养法、穿刺接种法、液体接种法。菌落是由某一微生物的少数细胞或孢子在固体培养基表面繁殖后所形成的子细胞群体，单个菌体在固体平面培养基上生长繁殖形成的肉眼可见的群体。因此，菌落形态在一定程度上是个体细胞形态和结构在宏观上的反映。由于每一大类微生物都有其独特的细胞形态，因而其菌落形态特征也各异。因此每一大类微生物都有其一定的菌落特征，可通过这些特征差异区分和识别。特征描述：形状、大小、颜色、边缘、隆起、光泽、质地等。在四大类微生物的菌落中，细菌和酵母菌的形态较接近，放线菌和霉菌形态较相似。实验器材 仪器：接种环、培养皿、酒精灯、试管、锥形瓶等 试剂：几种主要的细菌菌种、牛肉膏蛋白胨培养基实验步骤接种方法 一、斜面接种法 此法主要用于移种纯菌，使其增殖后用于鉴定或保存菌种。通常是从平板培养物上挑取某一单独菌落或者从一支已长好的斜面菌种，移种至斜面培养基上，接种步骤如下（以从已长好的斜面菌种转接为例）：（一）左手拿两支试管，一支为经灭菌的斜面，另一支为已长好的菌种。右手持接种环或接种针通过火焰灭菌后冷却，并同时以右手小指和无名指轻轻拔取两支试管的棉塞或试管帽（先转动棉塞后拔去），夹持于手指间。（二）将试管口通过火焰数次，并稍转动，以防止外界的污染。（三）首先将接种环伸入有菌试管，使接种环接触菌苔取少量菌，取出接种环，立即将管口通过火焰灭菌后将接种环伸入斜面管内，先从斜面底部到顶端拖一条接种线，再自下而上的蜿蜒涂布，或直接自斜面底部向上蜿蜒涂布。此步注意接种环不可碰试管壁和接种时不要划破培养基。（四）烧试管口，塞好棉塞或盖好试管帽，将接种环插到酒精瓶中。二、平板划线接种法（分离培养法） 是将细菌分离培养的常用技术，其目的是将混有多种细菌的培养物，或标本中不同的细菌使其分散生长，形成单个菌落或分离出单一菌株，便于识别鉴定。平板划线接种方法较多，其中以分段划线法与曲线划线法较为常用。（一）分段划线法平板分段划线(左)及培养后菌落分布图本法多用于含菌量较多的标本。方法是以接种环沾取少许样品先涂布于平板培养基表面一角作为第一段划线（划线时接种环与培养基表面呈45度角），然后将接种环置火焰上灭菌，冷却（可接触平板试之，如不融化琼脂，即已冷却），于第二段处再作划线，且在开始划线时与第一段的划线相交接数次，以后划线不必再相接，待第二段划完时，再如上法灭菌，接种划线，依次划至最后一段，灭菌接种环。这样每一段划线内的细菌数逐渐减少，即以获得单个菌落，划线接种完毕，盖好平皿盖，倒置（平板底部向上）于37℃温箱中培养。（二）连续划线法：此法多用于接种材料中含菌数量不太多的样品或培养物。方法是先将样品或培养物涂于平板表面的一角，然后用接种环自样品涂擦处开始，向左右两侧划开并逐渐向下移动，连续划成若干条分散的平等线。三、液体接种法此法多用于单糖发酵试验等，接种方法与斜面接种方法基本相同。以左手持培养基与菌种管，右手持接种环和拔持棉塞，将挑取的菌落或菌液接种于液体培养基内。培养细菌并进行菌落观察通过平板划线法获得细菌、酵母菌、霉菌和放线菌的单菌落。用三点接种法获得霉菌的单菌落。细菌平板放37恒温培养24~48小时。酵母菌平板置28培养2~3天。霉菌和放线菌置28培养5~7天。待长成菌落后，观察并记录四大类微生物菌落的形态特征。实验结果记录及分析细菌菌落特征：一般呈现较湿润、较光滑、较透明、较粘稠、易挑取、质地均匀、小而突起或大而平坦、菌落正反面或边缘与中央部位的颜色一致、一般有臭味或酸败味等。酵母菌菌落特征（与细菌相似) ：圆形或卵圆形，较湿润、较粘稠、表面较光滑，易挑取，菌落质地均匀，正反面、边缘和中心颜色一致等。但比细菌菌落大而厚，较不透明，颜色多呈乳白色，少数呈红色，多带酒香味。霉菌菌落特点： 比细菌菌落大，由菌丝组成疏松的绒毛状、絮状或蜘蛛网状，有的无固定大小，延至整个培养基