生物制药课(第六章).pptVIP

第六章 核酸类药物 本章主要内容 ? 核酸类物质的分离提取及其发酵生产 ? 主要核酸类药物的生产工艺 　　　　　　　　本章要求 （1）掌握酶解法制备核苷酸的方法 （2）掌握发酵法生产肌苷酸的基本方法； （3）了解叠氮胸苷、阿糖腺苷等的生产方法； （4）了解核酸类药物的分类以及主要临床用途 第一节 核酸类物质的分离提取及其发酵生产 一、核酸（DNA与RNA)的提取与制备 （了解） 1、工业用RNA的提取 （1）RNA及其工业来源 （2）高RNA含量酵母菌株的筛选 　　1.从自然界筛选 　　　2.诱变育种 （3）用工业废水培养高含量RNA酵母 　菌体在味精废水中（ 还原糖0.7％ 总糖 1.2％ 总氮0.2％ 总磷0.5％ 无机盐 0.1％-0.2％ ）驯化培养，发酵24小时，RNA含量8％-10％ （4）RNA提取实例 （二）DNA的提取与制备 1．工业用DNA的提取 　 2、生物活性DNA的制备 　 二、核苷酸的制备方法（熟悉） ? 　水解法（DNA或RNA经酶或碱水解） 　?　发酵法 　?　半合成法 （一）酶解法及碱水解法制备核苷酸 核酸酶P1 －－－酶法生产5‘核苷酸的主要工业用酶 来源：桔青霉(Penicillium citrinum)发酵 催化特性： 　　1）水解单链RNA和DNA中的3’----5’磷酸二酯键 　　　　　　　　　　　　　　　　（磷酸二酯酶活力强）　 　　2）水解单核苷酸和寡核苷酸中的3’-磷酸单酯键　 　　 　 　 3、双酶法生产肌苷酸和鸟苷酸（I＋G） I+G：呈味核苷酸　 4．菌体自溶法生产核苷酸 原理：磷酸二酯酶在合适的条件下降解细胞内的RNA可产生5′-核苷酸。 （1）谷氨酸产生菌体自溶法生产5‘-核苷酸工艺流程： 5．碱水解法生产2＇，3＇-混合核苷酸 　　 　　　 （二）发酵法生产核苷酸 1．发酵法生产肌苷酸（IMP） 菌种：产氨短杆菌 对菌种的要求： 1）使用腺嘌呤缺陷型菌株（解除腺嘌呤衍生物的反馈抑制） 2）菌体自身的5’－核苷酸降解酶活力低 3）选用Mn2+不敏感性变异株（培养基中添加限量Mn2+，以增加细胞膜的通透性，使肌苷酸在胞外大量合成） （三）半合成法制备核苷酸 工业生产的呈味核苷酸约有40-50％是由半合成法而制得 半合成法制备核苷酸的基本路线： 发酵法生产核苷?提取、精制? 磷酸化? 5′-核苷酸 三、核苷的制备 ? 化学法 ? 发酵法 （－）RNA化学水解法制备核苷 1．核苷生产工艺流程（图14·8） （二）发酵法生产核苷 规模： 千吨/年 优点：产量大，周期短，易控制。 产核苷菌株的共同特点： ①选用磷酸单酯酶活力强的枯草芽孢杆菌或短小芽抱杆菌的诱变出发菌株； ② 用物理或化学法筛选出诱变菌 ③发酵培养时必须提供限量的生长因素，并且好氧，在某一特定的范围内累积大量核苷。 1．发酵法生产肌苷 　菌种：枯草杆菌　　 　 　　 　 第二节 核酸类药物 ? ?核酸类药物的分类： 第一类：天然核酸类物质 （与代谢障碍疾病有关） 第二类：自然结构碱基、核苷、核苷酸结构的类似物或聚合物 （抗病毒、肿瘤、艾滋病药物，产生干扰素、免疫抑制） 一、叠氮胸苷（Azidothymidine，AZT） （一）结构与性质 AZT是1987美国FDA批准的治疗艾滋病药 （二）生产工艺 以胸苷为起始原料进行化学合成 起始原料胸苷的制备方法： ① DNA水解法 （主要方法） 二、阿糖腺苷Adenine arabinoside （一）结构与性质 化学名：9-β-D-阿拉伯呋喃糖腺嘌呤，或称腺嘌呤阿拉伯糖苷。 已有合成方法： ?发酵法 ?酶转化法 （二）生产工艺 1、酶-化学合成法 原料：尿苷 过程：氧氯化磷和二甲基甲酰胺反应、水解反应、酶法转化。 （三）作用与用途 作用：广谱DNA病毒抑制剂，对单纯疱疹Ⅰ、Ⅱ型，带状疱疹，巨细，牛痘等DNA病毒，在体内外都有明显抑制作用 用途：治疗单纯疱疹脑炎最好的抗病毒药物。 三、三氮唑核苷（熟悉） （一）结构与性质 商品名病毒唑，对DNA病毒、RNA病毒均有广泛