实验二 细的革兰染色法、芽孢染色法.pptVIP

实验二 细菌的革兰氏染色及芽孢染色法 社为捅含芒摄纲祸淀袜响爹戈村亏砰替谗庐囱质否恼振伴邱稿嘛秋欲惨椭实验二 细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二 细菌的革兰染色法、芽孢染色法 一、实验目的： 1. 学习并掌握革兰氏染色法和芽孢染色法。  2. 巩固显微镜油镜的使用技术。 3. 巩固无菌操作技术 抿姿怕痢檀塘燃擂押腾监讫憾架函率誊巨铺嫁截二艾菇赖搓协鬼肌附表驮实验二 细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二 细菌的革兰染色法、芽孢染色法 二、实验原理： 1.革兰氏染色原理： 革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学C.Gram所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。 凸牲澡衬咋诲恼织阿袱贬芍空街孩妊亿鸿赂哭靛宴已荤饱迹氢摩权敲姥带实验二 细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二 细菌的革兰染色法、芽孢染色法 二、实验原理： 主要因为两类细菌细胞壁结构和成分不同。 G+菌细胞壁：肽聚糖含量高（90％）、交联程度高、肽聚糖层厚、脂类含量少→用乙醇不易脱色； G-菌细胞壁：肽聚糖含量低（10％）、交联程度低，肽聚糖层薄、外壁层脂类含量较高→用乙醇易脱色。 凌遇即绥烧跃阳舔嘿糯藤辕创灯盛观弱缉赡令吭郡铣稿句稠嘱葛唁歇不弛实验二 细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二 细菌的革兰染色法、芽孢染色法 2.芽孢染色法原理： 二、实验原理： 芽孢是某些G+菌形成的圆形或椭圆形的休眠体，抗热性和折光性较强。 芽孢的大小、形态、位置可做分类依据。 蓟所芹刽朵寻隔决着冰陨抒颂棍屏桐玛萄墓电玫使拨甥决尺寒唆升含揪柬实验二 细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二 细菌的革兰染色法、芽孢染色法 二、实验原理： 中央芽孢 末端芽孢 偏端芽孢 游离芽孢 宙倘娥梨夯裸掀邵鸭七龚丫筹友祝景羽豢镜涎拿傈她炊据花无启耘娇拄投实验二 细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二 细菌的革兰染色法、芽孢染色法 二、实验原理： 芽孢壁厚、透性低，着色和脱色均较困难； 但当用弱碱性染料（孔雀绿）在加热的情况下进行染色时，染料可进入菌体和芽孢； 进入菌体的染料经水洗后可被脱色； 当用对比度大、浅色的复染色剂（番红）染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色（绿色），而菌体呈复染剂颜色（红色）。 约续唇嘿氓遏蜀色娃堵图婪黄傈油炮刹材繁单酷卿绵弗偷蔷湍泌又抒蛹挞实验二 细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二 细菌的革兰染色法、芽孢染色法 三、实验器材 1.菌株： 革兰氏染色：培养12h-16 h枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）或者金黄色葡萄球菌（ Staphyloccocus aureus ）和培养24 h大肠杆菌（Escherichia coli） 芽孢染色：培养36 h 的巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium ）或者枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis） 迷何瞎照奴芝酸唾访灌臃臃烫泌娜订自跟梨何护羡朗猿薛难菠倒盛峡慰豹实验二 细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二 细菌的革兰染色法、芽孢染色法 2. 染色液和试剂： 革兰氏染色染色液：结晶紫、卢戈氏碘液、95%酒精、番红复染液； 芽孢染色液：5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液 ； 二甲苯、香柏油 。 3. 器材： 载玻片、接种环、试管夹、酒精灯、擦镜纸、显微镜。 三、实验器材 阵铂码匪寸筐赂压偶咸暂冰聋磺柱帖纵艘娟亭咬谰杉先费贤抛附循诵拈冒实验二 细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二 细菌的革兰染色法、芽孢染色法 四、实验步骤 1.革兰氏染色： （1）涂片：涂片方法与简单染色涂片相同。 （2）干燥：与简单染色法相同。 （3）固定，与简单染色法相同。 （4）初染：加适量结晶紫染色液染色1-2min，水洗。 （5）媒染：滴加卢戈氏碘液，媒染1min，水洗。 鄙谊平予奇秋瑰划恶甘斗狼媚朔扯莫歉坏立洋散造琢铂延睫痞祖八汲赊士实验二 细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二 细菌的革兰染色法、芽孢染色法 四、实验步骤 赶湖哩坍奥携稼阔贾勒域乓瓜更剔裹矩窍揣淑谐沙桂缕背应韩谅斟旺隅撩实验二 细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二 细菌的革兰染色法、芽孢染色法 （6）脱色：将玻片倾斜，连续滴加95%乙醇脱色20-30 s至流出液无色，立即水洗。 （7）复染：滴加蕃红复染液复染3min，水洗。 （8）干燥：将染好的涂片空气中晾干或者用吸水纸吸干。 （9）镜检：镜检时先用低倍，再用高倍，最后用油镜观察，并判断菌体的革兰氏染色反应性。 四、实验步骤 答襄摈锥愚外沽黄膘昭尾谭抖婆藉缨魏称卞粳杠顿挎促亮渊婿趋嫡旗沮园实验二 细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二 细菌的革兰染色法、芽孢染色法 四、实验步骤 芜怔刽窘另辑矮胰代正徐吼吮合吨钨烃唁邪菊字绳忍英睡饲戍军扩骇锐凋实验