2010实一二_重组质粒DNA提取、双酶切鉴定、凝胶电泳、紫外分光法.pptVIP

质粒DNA的提取、纯化、酶切、电泳、 紫外分光光度法定量测定 朱文博 中山医学院 基因工程 定义： 实现基因克隆所采用的方法及相关的工作统称为重组DNA技术，又称重组DNA技术。 2 提取大肠杆菌质粒DNA的方法和原则 2.3 核酸分离纯化的总原则： (1) 保证核酸一级结构完整 (2) 排除其他分子的污染（蛋白质、脂类、 糖、 有机溶剂、金属离子、其他DNA、RNA等） 1.1 影响DNA在凝胶中迁移速率的因素 1 DNA分子的大小 2 构象 3 凝胶浓度 4 电压 5 缓冲液 3.3 实验步骤 加1.5ml培养物于EP管，12000g×30S ? 除去上清，加入冰的200 μl 溶液I，剧烈振荡EP管，室温3min ? 加入200μl 溶液II，快速颠倒数次，冰浴3min ? 加入150μl 冰溶液III，温和振荡10s，冰浴5min，12000g×5min 转移上清到新EP管，加入等体积酚/氯仿(1:1)，温和振荡，冰浴3min，12000g×5min? 上层水相转移到新EP管，加入2倍体积无水乙醇，颠倒混匀， -20 ℃ 冰箱中放置15min，12000g?10min ? 弃上清，沉淀中加1ml 70%乙醇，12000g×5min 去上清，管平放室温静置10min， 20 μl TE 溶解D