DB35-T137.5-2001古田银耳菌种制作规程.docVIP

前 言 本部分是古田银耳标准综合体中，规定了的 本标准由福建省质量技术监督局、福建省农业厅提出。 本标准主要起草单位：古田县质量技术监督局、古田县食用菌办公室。 本标准主要起草人：林祖寿、蔡金波、张国雄、彭冬祥、徐彦彦、张汉文、戴维浩。 古田银耳标准综合体 菌种制作规程 1 范围 本标准规定了古田银耳标准综合体菌种制作中的术语和定义、基本设备、一级种制作、二级种培养、三级种培养、病虫害防治、菌种质量要求、检验方法、标志包装保存运输。 本规程适用于古田银耳菌种制作。 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 2.1 耳片 银耳子实体的瓣片。 2.2 耳基 银耳子实体基部，呈桔黄色或垩白色、硬实、蒂状与培养基质相联结的部分。 2.3 交合 将培养成熟的银耳纯菌丝与香灰菌丝按一定比例混合，培育有生产价值的银耳菌种的方法。 2.4 基质块 在银耳子实体的耳基正下方,由以银耳纯菌丝为主和少量香灰菌丝、培养基扭结而成的硬块层。 2.5 基内分离 在生长子实体的培养基内分离出菌种的专门技术。 2.6 分泌液 银耳菌种正常的生理活动产生的无色、清黄或清红色的分泌液。 2.7 吐黑水 银耳菌种被病原菌污染，或培养条件不适宜出现的异常现象。 2.8 “杨梅霜病”（俗名） 菌种受为害时，局部表面出现白色粉斑，周围白毛团生长受抑制或逐渐消溶。 2.9 “死菌” 菌种受为害时，前期香灰菌丝可生长，中期香灰菌丝稀疏，菌丝前端出现粉红色或褐色，后期香灰菌丝停止生长。 3 基本设备 3.1 原料仓库 面积等于或大于20m2，建在制种厂的西北向，要求干燥、通风、环境卫生、远离畜、禽舍。 3.2 洗涤室 面积等于或大于10m2，水泥地面，平整，有水源。室内配备：台秤，工业天平，50、100、500ml量杯，铁铲，水桶，铝锅，电炉，煤气炉，小压板，瓶刷，试管筐，试管（18×180mm），玻璃漏斗，漏斗架，纱布，棉塞，750ml菌种瓶。 3.3 灭菌室 要求水泥地面，有水源。室内配备：手提高压蒸汽灭菌锅，卧式高压蒸汽灭菌锅。 3.4 菌种培养室 菌种培养室应设2间。每间面积等于或大于15m2，要求干净、通风、保温，水泥地面，平整。室内配备：加温设备、加湿设备、空调机、多层菌种架、温湿度计、吸尘器、恒温箱。 4 一级种制作 4.1 培养基制作 4.1.1 琼脂培养基制作 采用马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA），即去皮马铃薯200g、琼脂18g～20g、葡萄糖20g、水1000ml；pH自然。按常规方法，将培养基配制，装入试管，灭菌制成试管斜面培养基。 4.1.2 木屑培养基制作 木屑培养基配方：银耳适生木屑71%、麸皮25%、蔗糖2%、石膏粉1.5%、硫酸镁0.2%、磷酸二氢钾0.3%；料水比，高温季节1:1.3，低温季节1:1.2。按常规方法，将培养基拌匀，装瓶（瓶内装料7cm～8cm高），灭菌制成木屑培养基。 培养基的pH 6～6.5，培养基的酸碱度不合要求，可按常规方法进行调整。 4.2 一级种制作 4.2.1 纯分离再交合法 4.2.1.1 银耳纯菌丝分离 4.2.1.1.1 材料选择 子实体生长28d左右，朵大7cm～8cm，朵型圆正，生长健壮，耳片白且厚，无病害的银耳菌袋。 4.2.1.1.2 取基质块 切去银耳子实体，挖出耳基正下方基质块，并切成2cm×2cm×2cm的方块做分离材料。 4.2.1.1.3 基质块脱水 将基质块用纱布包好，置于底层放有变色硅胶或五氧化二磷干燥剂的玻璃干燥器中强行脱水10～20d，或置于阴凉通风处30d左右风干。 4.2.1.1.4 分离培养 在无菌箱内，把基质块切开，在基质块的中、上层，钩取1mm3的白色菌丝（含基质），接种在琼脂培养基上，每支试管接1至3粒。用同样方法接20支～30支试管，在24℃的室温中培养8d～10d。 4.2.1.1.5 提纯转管 选取生长健壮，圆正，丰满的白毛团，用接种针在白毛团边缘挑取1.5mm3带培 养基的银耳纯白菌丝，移接到已灭菌新的PDA试管斜面上，置于20℃～24℃下培养10d左右。 4.2.2 香灰菌丝分离 4.2.2.1材料选择 子实体生长28d左右，朵大7cm～8cm，朵型圆正，香灰菌丝生长有力，培养料表面黑色素分布均匀，无病虫害的菌袋。 4.2.2.2从银耳菌袋底部直接钩取香灰菌丝0.5mm3，置于PDA试管斜面上培养。用同样方法接20支～30支试管斜面，培养温度24℃～26℃。 4.2.2.3 提纯转管 培养5～6d左右，取香灰菌丝尖端部位约0.5mm3（含琼脂培养），移接到已灭菌的PDA试管斜面上。用同样方法接20～30支试管斜面，在24℃～26℃温度下培养5d左右。 4.2.2.4 交合培