免疫学检验实验指导安徽医高专.docVIP

免疫学检验实验指导 ? 安徽医专微生物学免疫学教研室 2005年12月 ? 目录 实验室规则：实验课的目的要求? 实验室规则 第一单元? 血清学技术 第一节 免疫血清的制备 第二节 凝集反应 实验一? 直接凝集反应 一、玻片凝集试验 二、试管凝集反应——肥大氏反应 实验二? 间接凝集反应（类风湿因子检测） 实验三? 间接凝集抑制试验------乳胶妊娠试验 第三节 沉淀反应 实验四? 凝胶沉淀反应 一、单相琼脂扩散试验 二、双向琼脂扩散试验 三、对流免疫电泳 四、火箭免疫电泳 第四节 溶血反应和补体结合试验 实验五 50%溶血试验（CH50）测定补体 第二单元 免疫标记技术 实验六? 酶联免疫吸附实验（ELASA） 实验七? 免疫荧光技术 一、直接法——病原微生物的快速检测 二、间接法 第三单元? 免疫细胞的检测 实验八? 中性粒细胞吞噬功能试验（小吞噬试验） 实验九? E花环形成试验 实验十? 淋巴细胞转化试验 第四单元? 细胞因子检测 实验十一? 白细胞介素-2（IL-2）生物学活性测定 实验十二? 血清可溶性白介素-2受体（sIL-2R）水平的检测 ? ? 实验室规则 一、实验课的目的要求 免疫学实验课的目的是加强和巩固对课堂讲授的基本理论的理解和体会，学习和掌握免疫学实验的基本操作技术。为今后的实际工作和科研工作打下基础。为上好免疫学实验课，要求同学做到如下各点： 1.?????? 课前务必做好充分预习，明确实验目的、原理、方法及操作中的注意事项，做到心中有数。 2.?????? 在实验进程中，严格按照实验指导所列步骤和要求进行操作，坚持实验的严肃性、严格性、严密性。 3.?????? 真实记录实验结果，对错误的结果要认真分析，找出原因，得出结论。实验完成后，写出实验报告及时交给老师批改。 4.?????? 严格遵守实验室规则，防止各种事故发生。 二、实验室规则： 免疫学实验材料，有些是病原微生物，在实验中稍一不慎和防护上的不善，便有发生人身感染的可能。所以要求同学认真遵守下列各点： 一、尽量不带个人生活、学习用品入实验室，必要的用具带入后，应放在远离操作的位置。 二、进入实验室后穿上工作衣，离室时脱下反叠带走。在实验室内应保持安静、整洁、有秩序，不得高声谈笑，随便走动或拆卸仪器、搬弄标本。 三、实验室内严禁吸烟、进食、饮水，严禁用嘴吸移液及润湿标签，尽量不要用手触摸头面部及身体其他暴露部位。 四、如遇不慎而打破菌种管或使有菌材料污染皮肤、衣物、桌面等情况，应立即报告指导教师，切勿隐瞒或自行处理。 五、被污染过且需要回收的吸管、滴管、试管、玻片等物应用完后立即投入已准备的消毒液中，不得放在桌面上或水槽内。 六、爱护公物，节约试剂材料，不得将实验室任何物品私自带走。如遇仪器、用品损坏，应报告指导教师并按规定予以赔偿。 七、实验完毕，整理桌面，值日生打扫室内卫生，最后离开的同学应注意关好水电、门窗，洗手后离室。 ? 第一单元? 血清学技术 实验目的 掌握体外抗原抗体反应的特点和影响因素； 掌握经典的体外抗原抗体反应的原理、方法和应用。 第一节 免疫血清的制备 免疫血清的制备是一项常用的免疫学实验技术。高效价、高特异性的免疫血清可作为免疫学诊断的试剂(如用于制备免疫标记抗体等)，也可供特异性免疫治疗用。免疫血清的效价高低取决于实验动物的免疫反应性及抗原的免疫原性。如以免疫原性强的抗原刺激高应答性的机体，常可获得高效价的免疫血清。而使用免疫原性弱的抗原免疫时，则需同时加用佐剂以增强抗原的免疫原性。免疫血清的特异性主要取决于免疫用抗原的纯度。因此，如欲获得高特异性的免疫血清，必须予先纯化抗原。此外，抗原的剂量、免疫途径及注射抗原的时间间隔等，也是影响免疫血清效价的重要因素应予重视。 基本原理 具有免疫原性的抗原可刺激机体相应B细胞增殖、分化形成浆细胞并分泌特异性抗体。由于抗原分子表面的不同决定簇为不同特异性的B细胞克隆所识别，因此由某一抗原刺激机体后产生的抗体，实际上为针对该抗原分子表面不同决定簇的抗体混合物(即多克隆抗体)。 本实验以弗氏完全佐剂(FCA)乳化的抗原(人IgG)为抗原，来制备家兔抗人IgG免疫血清。要求学生初步学会免疫原和佐剂的制作及免疫血清制备的基本方法，了解其意义和应用，熟悉动物实验的基本知识。 材料 1、动物：健康成年家兔，雄性，体重2～3公斤。 2、器材：剪刀、镊子、注射器(2ml、50ml)附针头(9号、6号)、称量瓶(10ml)、量筒、动物固定架、灭菌三角烧瓶(200ml)、手术器械一套、血管夹、黑丝线、塑料放血管等。 3、试剂：灭菌生理盐水；纯化人IgG(10mg／ml)；消毒酒精及碘酒；羊毛脂；石蜡油；活卡价苗(BCG)(75mg／ml)；　弗氏不完全佐剂(FIA)制备：称羊毛脂10克，逐滴