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入侵检测,立项申请书 篇一：TKTL1项目申请书 科研项目申请书 课题名称： 协作单位： 研究期限： 研究类别： 填表日期： TKTL1和DNASE1L1蛋白在肿瘤早期诊断中的应用 北京金沐医疗科技有限公司 2017年-2019年预防医学 2016年8月17日 一、摘要 二、立项依据与研究内容 （1）项目的立项依据 单核/巨噬细胞是人类免疫系统细胞的重要组成部分。人类外周血细胞可以主要分为无核细胞（主要为血红细胞）和有核细胞（白细胞等）。单核细胞约占有核细胞总数的5%左右，由髓系造血祖细胞分化而来，是免疫系统中抗原递呈细胞（APC细胞）的重要组分。其在人体循环系统内成熟分化并实现免疫学功能可以大致分为以下步骤：毛细血管中的单核细胞→透过血管壁进入血管外组织→发现异源性物质（细菌、病原体、肿瘤细胞等），分化为成熟的巨噬细胞→吞噬并消化，将抗原递呈到特定的细胞表面分子上→经由淋巴管回流到外周血→完成抗原递呈激活杀伤性免疫细胞。作为机体抗击外来病原侵袭和清楚自身非正常细胞机制的哨兵，巨噬细胞是免疫系统形成免疫应答的重要环节，作用重大。在正常人体内每时每刻都有向着肿瘤化（永生化、非正常凋亡）发展的细胞产生，正常的机体免疫机制可以通过上述过程，将其及时清除。但随着肿瘤细胞的演化，生成了躲避免疫杀伤的机制，或者机体总体免疫力的下降，形成免疫逃逸，最终在患者体内形成肿瘤包块。由此可见无论健康人群还是癌 症患者体内巨噬细胞对于肿瘤化细胞的吞噬作用，都是无时无刻不在进行的。针对单核/巨噬细胞内肿瘤来源物质（包括蛋白质、核算、脂类等）的观测，可以为我们提供一个监控体内肿瘤发生、发展的崭新视角，其应用前景必然非常广泛。 肿瘤是目前世界第二大死因，严重威胁人类健康。尽管现代医学飞速发展，并且在肿瘤研究和治疗方面也不断大量投入，但是当肿瘤发生局部扩散和远端转移等后期阶段时，现代治疗手段也是一筹莫展，对肿瘤治疗收效甚微；而许多患者的肿瘤在被诊断时已经处于晚期阶段。在过去几十年中，这些晚期肿瘤患者的5年生存率没有发生太大变化。相反的是，早期肿瘤患者的预后相对来说要好很多。现代医学科学的进步和先进的医疗手段对于早期阶段的肿瘤，特别是原位肿瘤的治疗具有显著的疗效。因此，现代医学已经把重点聚焦于肿瘤的早期发现，使肿瘤在发展到晚期之前得到有效的治疗。 肿瘤标志物是指在肿瘤的发生、发展过程中，由肿瘤细胞本身所产生的、或者由机体应对肿瘤细胞而产生的特异性分子。这些分子可以反映肿瘤的存在和进展，往往特异性出现在肿瘤患者，而在正常人不存在、或其表达水平与肿瘤患者相比有显著差异。目前发现的具有临床意义的100多种肿瘤标志物中，有一大部分是存在于患者的血液中，比如许多肿瘤相关抗原（TAA）或肿瘤特异或癌胚抗原，肿瘤相关抗体或自身抗体等。这些血清中的肿瘤标志物的存在给肿瘤早期的检测和诊断提供了可能和便捷途径。 现有的关于肿瘤标志物的检测技术主要包括肿瘤基因测序以及ctDNA测序技术。其中，肿瘤基因测序是应用肿瘤活检组织提取DNA测序，主要用以辅助诊断和指导个体化用药，该检测技术为有创取样，必须先明确肿瘤病灶发生位置，不能用在早诊筛查领域。ctDNA测序是分离富集外周血中游离的肿瘤DNA并进行测序，目前主要应用集中在肿瘤复发监控、用药指导等方面，然而，由于外周血中ctDNA含量稀少，尤其在肿瘤早期阶段收集不到足够用于测序实验的ctDNA量，故该方法应用受到很大限制。 单核/巨噬细胞作为有核细胞的重要组分，现有技术一般是通过其表面抗原分子CD14和CD16进行检测的，目前可以买到成熟的抗体。主要的临床应用集中在血细胞组成检测和造血系统肿瘤（如：粒/单核细胞性白血病）方面的检测中，为临床诊断提供重要参考。就目前专利和文献检索来看，将肿瘤抗原与 实体肿瘤的监控联系还有待进一步研究。 参考文献： （2）项目的研究内容、研究目标, 以及拟解决的关键科学问题 1〉研究目标 本项目致力于TKTL1和DNASE1L1在肿瘤检测中的应用研究。我们通过在病人血液中寻找吞噬相关的细胞，在这些细胞中寻找肿瘤相关的分子：如蛋白，核酸等。该项目中，我们通过检测巨噬细胞中TKTL1和DNASE1L1的表达量，来确定病人身体内肿瘤发生发展状况，根据本项检测，给病人的肿瘤诊断，治疗及预后提供建议和数据支持。 2〉研究内容 ①TKTL1和DNASE1L1特异性抗体的制备 在TKTL1和DNASE1L1蛋白序列中选出抗原性和特异性较好的多肽片段用作抗原，合成多肽免疫小鼠，制备融合细胞株；通过筛选，获得表达量和特异性较好的细胞株，ELISA验证后，大量表达这两个蛋白的抗体，并用荧光分子分别标记这两个抗体。 ②TKTL1和DNASE1L1特异性抗体