基因工程操作过程312.pptVIP

一、获取目的基因 1、通过基因文库获取目的基因 （1）基因文库的含义： 先用酶切等方法将某种生物细胞的整个基因组DNA切割成大小适合的片段，再将这些片段分别与载体链接起来，导入受体菌的群体并储存起来，这样每个受体菌可能分别含有该种生物的不同基因，因此这个群体被称为基因文库 2、通过PCR（聚合酶链式反应）技术扩增目的基因 （1）PCR技术的含义： 是在体外通过酶促反应有选择地大量扩增目的基因或DNA序列的技术。 （2）目的：获取大量的目的基因 （3）原理：DNA双链复制 （4）前提： 要有一段已知的目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物。 3、通过化学方法直接人工合成 较小的目的基因，而且DNA核苷酸序列已知，则可人工合成。 常用方法:反转录法、化学合成法 第一步，反转录酶以RNA为模板合成一条与RNA互补的DNA单链，形成RNA-DNA杂交分子。 第二步，核酸酶H使RNA-DNA杂交分子中的RNA链降解，使之变成单链的DNA。 第三步，以单链DNA为模板，在DNA聚合酶的作用下合成另一条互补的DNA链，形成双链DNA分子。 二、制备重组DNA分子 1、放法： 用同一种限制酶分别切割带有目的基因的外源DNA片段和载体，在体外用DNA连接酶把两者连接，形成重组DNA分子。 三、转化受体细胞 目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为转化。 2、农杆菌为何感染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有感染力？ 3、简述农杆菌转化法的过程 原核生物作为受体细胞的原因？目的基因导入大肠杆菌的方法是怎样的？钙离子有什么作用？ 四、筛选重组细胞 1、插入灭活法筛选并鉴定（P15) 2、DNA分子杂交（基因探针） 3、免疫化学检测（抗原—抗体） 4、个体生物学水平鉴定 五、实现功能表达 课本P15—16 2、有关基因工程的叙述正确的是（ ） A 、限制性内切酶只在获得目的基因时才使用 B 、DNA连接酶可以切断磷酸二酯键 C、 质粒都可以做载体 D 、基因工程都能定向改变生物的性状 * 第一节 基因工程概述第2、3课时:基因工程的过程与技术 基因工程的基本操作程序 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 　 目前被较广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、人胰岛素基因、种子贮藏蛋白基因、植物抗病基因等。 基因操作的基本步骤 一、目的基因的获取— 将需要的基因从供体生物的细胞内提取出来。 供体生物细胞 取出DNA 用限制酶剪去多余部分 目的基因 限制酶 1、目的基因主要是指______________________ 编码蛋白质的结构基因 请举出三个以上的例子 2、获取目的基因的常用方法 （1）从基因文库中获取 （3）利用PCR技术扩增 （2）人工合成 基因操作的基本步骤 一、目的基因的获取 基因文库 基因组文库(含一种生物所有基因） 部分基因文库（只含部分基因） 如cDNA文库 （2）从基因文库中获取目的基因： 依据目的基因的有关信息 如：根据基因的核苷酸序列 基因的功能 基因在染色体上的位置 基因的转录产物mRNA 基因的表达产物蛋白质等信息，直接从基因文库中获取目的基因。 模板 原料 引物 酶 控制温度 ——目的基因DNA ——四种脱氧核苷酸 ——如单链DNA分子片段或RNA ——耐热的DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶) ——PCR仪自动调控 （4）PCR技术的条件： PCR的过程 变性(90-95℃) 复性(55-60℃) 延伸(70-75℃) 重复 指数形式扩增 2n 肽链氨基酸序列 信使RNA核苷酸序列 DNA的核苷酸序列 目的基因 合成 推测 推测 mRNA DNA 逆转录 原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片段，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质 终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片段，能终止mRNA的转录 真核细胞的基因结构 思考：mRNA反转录得到的cDNA是否含有启动子、终止子、内含子?与本来DNA相比，是长了还是短了? mRNA 单链DNA 双链DNA 反转录 如何构建cDNA文库？ 质粒 DNA分子 同一种限制酶处理 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 2、基因表达载体的组成： 标记基因等