重医大2011级硕士研究生蛋白质组学试题附答案.docVIP

重庆医科大学 2011级硕士研究生《蛋白质组学》试题 姓名 魏俊 学号：2011120028 所在大班：蛋白质组学5班 专业： 在职医学影像 一、解释（共15分） 1、MALDI TOF MS（10分）答：即基质辅助激光解析离子化/飞行时间质谱，为近年来快速发展的一种新型软电离生物质谱，该仪器主要由两部分组成：基质附助激光解吸电离离子源（MALDI）和飞行时间质量分析器（TOF）。MALDI-TOF-MS的中心技术依据样品的质荷比（m/z）的不同来进行检测，并测得样品分子的分子量。MALDI-TOF-MS具有灵敏度高、准确度高及分辨率高等特点。近年来已成为生命科学领域蛋白质组研究中必不可缺的重要关键技术之一检测和坚定多肽、蛋白质、多糖、核苷酸、高聚物以及多种合成聚合物的强有力的工具。。/血清蛋白质组研究中需要着重注意的问题（10分）。 1、血浆/血清样品选择 ①去血小板的血浆由于避免血小板的激活作用，减少了蛋白质的体外降解，因而较血清更适合一定的肽组学研究； ②去血小板的EDTA血浆或枸橼酸血浆样品，更适合分析低分子质量的蛋白质； ③如果要使用一定的蛋白酶抑制剂，一定要在早期加入，而且要谨慎使用，因为抑制剂的加入可能对MS分析造成一定的干扰，而且一些小分子的抑制剂与蛋白质结合转化成蛋白质的亚型，这些都将使得分析结果变得复杂。 2、样品的收集与贮存 ①为减少血小板的污染，血液样品在分析前最好用0.2μm的低蛋白质结合膜过滤，样品分装冰冻储存，减少融化-再冰冻的循环； ②样品应分装并贮存在液氮中，减少或不加蛋白酶抑制剂，以减少对测定结果的干扰。 3、去除高丰度蛋白和分级技术 血浆/血清样品中蛋白质种类很多，而且所含蛋白质具有较大的动力学范围，其中有许多丰度较高但不含有特殊生物学信息的蛋白质，这将会对目标蛋白质的分析造成极大的困难，甚至根本不能检测低丰度蛋白质，因此，通过对原始蛋白质进行洗脱和分步分离减少样品中蛋白质的复杂性，可以极大简化蛋白质的预测和分析，提高对低丰度蛋白质的检测和识别的灵敏度和准确度。 4、多维策略的运用 鸟枪测序法(Shotgun sequencing)，即高丰度蛋白去除 + 全蛋白酶解 + 二维液相色谱(阳离子/阴离子交换色谱 + 反相色谱)分离 + 质谱鉴定(离子阱或Q-TOF串联质谱) 3、药物蛋白质组学定义及主要研究领域。试举例说明其在药物靶点的发现和确认中的应用（10分）。 药物蛋白质组学就是蛋白质组学技术在药物研发中的应用。 药物蛋白质组学的主要研究领域：临床前研究-发现所有可能的药物作用靶点，以及针对这些靶点的全部可能的化合物，以及应用蛋白质组学方法研究药物作用机制和毒理学；临床研究方面-发现药物作用的特异蛋白作为患者选择有效药物的依据和临床诊断的标志物，或以蛋白质谱的差异将患者分类并给予个体化治疗。药物作用靶点的发现和确认：阐明药物的作用机制；药物毒理作用机制。耐药性及个体化治疗的研究；中药现代化中的研究应用 药物蛋白质组学在药物靶点发现和确认中的应用举例： （1）研究人员通过比较给药前后的蛋白质组，找到了药物阿霉素抗乳腺癌的一个作用 靶标Hsp27。 （2）疟原虫入侵血红细胞的阻断靶点探测：半胱氨酸蛋白水解酶是疟原虫生存必需的酶，Greenbaum等利用靶向半胱氨酸蛋白水解酶的化学探针I125-DCG-04打靶，然后通过抗DCG-04的生物素纯化，得到了半胱氨酸蛋白水解酶类的亚蛋白质组；通过酶活性分析，最终发现在疟原虫的入侵血红细胞的裂殖期，仅有一个有半胱氨酸蛋白水解酶活性的蛋白质—falcipain 1；从数据库筛选到falcipain 1的抑制剂YA29-Eps，结果证实YA29-Eps可阻断疟原虫的入侵红细胞。 4、结构蛋白质组学与功能蛋白质组学的研究方法和内容的差异，以及在临床研究和应用上的特点与作用（10分）。 结构蛋白质组学又称组成蛋白质组学，这是一种针对有基因组或转录组数据库的生物体或组织、细胞，建立其蛋白质或亚蛋白质组(或蛋白质表达谱)及其蛋白质组连锁群的一种全景式的蛋白组学研究，从而获得对有机体生命活动的全景式认识。蛋白质组学在心血管基础和临床研究中 ②应用心血管疾病蛋白标记物来更早、更准确地检测心血管疾病，尤其是急性冠脉综合征(ACS)； ③蛋白质组学来源的信息作为目前患者诊断的补充； ④蛋白质组检测获得的信息有利于个体化治疗，为其提供新的治疗靶位； ⑤蛋白质组学检测工具和信息用于治疗的各个阶段，可以适时评估治疗的效果和校正治疗方案。 6、目前的蛋白质组学技术在医学研究中的优势和不足（10分）。 答：蛋白质组学在疾病的研究中占有十分重要的地位，旨在运用蛋白质组学的研究手段，通过比较正常和病理情况下细胞、组织或体液中蛋白质在组成成分、表