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实验三 血红蛋白测定及 适用对象：医学检验专业本科学生 目 录 实验目的 实验原理 实验操作 计算及正常参考值 血红蛋白测定及曲线的绘制 一、实验目的： 掌握氰化高铁血红蛋白比色法原理及技术。 二、实验原理： 血液在血红蛋白转化液中溶血后，除SHb外各种血红蛋白可被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白，再与CNˉ结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋（HicN）。 HicN最大吸收峰540nm，最小吸收波谷504nm，在特定的条件下，毫摩尔消光系数为44L.mmol-1 .cm-1 ，因此根据标本的吸光度，即求得血红蛋白浓度。 血红蛋白测定及曲线的绘制 三、实验操作： 1、取指血20ul，加到5ml血红蛋白转化液中，混匀，静止5分钟。 2、用分光光度计比色，波长540nm，以蒸馏水或空白转化液调零，测定吸光度。 3、用血红蛋白浓度为50g/L、100g/L、150g/L、200g/L在721型分光光度计上测定吸光度分别为0.13，0.27，0.405，0.54. 血红蛋白测定及曲线的绘制 三、实验操作： HicN曲线图 血红蛋白测定及曲线的绘制 氢化高铁血红蛋白标准曲线或按下式求出吸光度血红蛋白换算常数（K值） K=qHb（g/L）/qA=（50+100+150+200）/（0.13+0.27+0.405+0.54）=371.75 四、计算:血红蛋白（g/L）=测定管吸光度×K 正常参考值： 成年男性：120-160g/L 成年女性：110-150g/L 新生儿： 170-220g/L 祝同学们试验成功！ * * 曲线的绘制 0 50 100 150 200 吸光度值 (A) 0.1 0.2 0.3 0.6 0.4 0.5 血红蛋白浓度（g/L） . . . . *
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