基因重组方法=全课件.ppt

自然转化过程的特点： a）对核酸酶敏感； c）转化是否成功及转化效率的高低主要取决于转化（DNA） 给体菌株和转化受体菌株之间的亲源关系； d）通常情况下质粒的自然转化效率要低得多； 提高质粒的自然转化效率的二种方法： 1）使质粒形成多聚体，这样进入细胞后重新组合成有 活性的质粒的几率大大提高； 2）在质粒上插入受体菌染色体的部分片段，或将质粒转 化进含有与该质粒具有同源区段的质粒的受体菌-------重组获救 b）不需要活的DNA给体细胞； 噬菌体DNA被感受态细胞摄取并产生有活性的病毒颗粒 转染(transfection)： 现在把DNA转移至动物细胞的过程也称转染 提纯的噬菌体DNA以转化的（而非感染）途径进入细胞 并表达后产生完整的病毒颗粒。 特点： 接合 (conjugation)： 细胞与细胞的直接接触（由F因子介导） 转导(transduction)： 由噬菌体介导 自然遗传转化(natural genetic transformation)： 游离DNA分子 + 感受态细胞 “接合” “转导” 及“自然转化”这三种在自然界中 存在的细菌遗传重组过程各自的特点： a）外源DNA的来源及进入途径有差异； b）决定因素也各有不同； (2)人工转化 用CaCl2处理细胞，电穿孔等是常用的人工转化手段。 在自然转化的基础上发展和建立的一项细菌基因重组手段， 是基因工程的奠基石和基础技术。 不是由细菌自身的基因所控制； 用多种不同的技术处理受体细胞，使其人为地处于一 种可以摄取外源DNA的“人工感受态”。 质粒的转化效率高； 在自然环境中，真核微生物就存在有性生殖和准性生殖等基因重组的形式。 酵母菌有性杂交 霉菌的准性杂交 3.2 真核生物的基因重组 3.2.1 酵母菌的有性杂交 酵母菌的生活史既包括二倍体、单倍体世代，又包括有性和无性世代。 二倍体 单倍体 减数分裂形成子囊孢子 每个子囊中含有四个单倍体的子囊孢子 * 3、基因重组 基因重组（gene recombination）是两个独立基因组内的遗传基因，通过交换与重新组合形成新的稳定基因组的过程。 原核微生物基因组 通常只是部分遗传物质的转移和重组，并且通过转化、接合和转导等形式进行； 真核微生物的基因重组 发生在有性繁殖过程中，通过减数分裂后整套染色体发生高频率交换（基因重组） 在真核微生物中的部分真菌存在不通过减数分裂而在有丝分裂过程产生低频率基因重组的准性生殖方式 细菌的三种水平基因转移形式 接合 转导 自然转化 3.1 原核生物的基因重组 接合 (conjugation)： 细胞与细胞的直接接触（由F因子介导） 转导(transduction)： 由噬菌体介导 自然遗传转化(natural genetic transformation)： 游离DNA分子 + 感受态细胞 3.1.1细菌的接合作用(conjugation) 通过细胞与细胞的直接接触而产生的 遗传信息的转移和重组过程 (1).实验证据 1946年，Joshua Lederberg 和Edward L.Taturm 细菌的多重营养缺陷型杂交实验 （参见 P 215） 中间平板上长出的原养型菌落 是两菌株之间发生了遗传交换 和重组所致！ 证实接合过程需要细胞间的直接接触的 “U”型管实验（ Bernard Davis，1950 ） (2) 机制 (大肠杆菌的接合机制) 接合作用是由一种被称为F因子的质粒介导 F因子的分子量通常为5×107，上面有编码细菌产生性菌毛 （sex pili）及控制接合过程进行的20多个基因。 含有F因子的细胞：“雄性”菌株（F+），其细胞表面有性菌毛 不含F因子的细胞：“雌性”菌株（F-），细胞表面没有性菌毛 F因子为附加体质粒 既可以脱离染色体在细胞内独立存在，也可插入（整合）到染色体上 F因子的四种细胞形式 a）F-菌株， 不含F因子，没有性菌毛，但可以通过 接合作用接收 F因子而变成雄性菌株（F+）； b）F+菌株， F因子独立存在，细胞表面有性菌毛。 c）Hfr菌株，F因子插入到染色体DNA上，细胞表面有性菌毛。 d）F′菌株，Hfr菌株内的F因子因不正常切割而脱离染色体时， 形成游离的但携带一小段染色体基因的F因子，特称为F′因 子。 细胞表面同样有性菌毛。 1） F+×F-杂交 杂交的结果：给体细胞和受体细胞均成为F+细胞 理化因子的处理可将F因子消除而使F+菌株变成F-菌株 F+菌株的F因子向F-细胞转移，但含F因子的宿主细胞 的染色体DNA一般不被转移。 Hfr菌株的F因子插入到染色体DNA上，因此只要发生接合转移转移 过程，就可以把部分甚至全部细菌染色体传递给F-细胞