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实验六 糖原染色 实验目的与要求： 1．掌握糖原染色的原理及临床意义。 2．熟悉糖原染色的操作要点。 实验仪器、试剂： 甲醇、过碘酸 、雪夫试剂、苏木素染液、染色缸、5ml吸管洗耳球、玻片架、显微镜、香柏油、二甲苯、拭镜纸 实验原理： 过碘酸是氧化剂，使含乙二醇的糖类物质氧化形成双醛基。醛基与雪夫试剂中的无色品红结合，形成紫红色物质，附着于含有多糖类的胞浆中 。 操作方法： 1.涂片用95%乙醇固定10分钟，水洗、待干。 2.放入高碘酸中氧化10-15分钟，水洗、待干。 3.放入雪夫试剂30-60分钟。 4.亚硫酸冲洗2-3分钟 5.用甲绿染液复染10-20分钟水洗、待干。 6.镜检 实验现象与数据： 胞浆呈红色或胞浆内出现红色颗粒为阳性反应胞浆无色或胞浆内无红色颗粒为阴性反应。 结果分析与结论： 正常血细胞的染色反应 （1）粒细胞系统： a、分化差的原始粒细胞为阴性反应 b、分化好的原始粒细胞至中性分叶核粒细胞阳性反应程度逐渐增强 c、嗜酸性粒细胞的嗜酸颗粒本身不着色，而颗粒之间的胞浆呈红色 d、嗜碱性粒细胞呈阳性反应，阳性反应物质为大小不一的紫红色颗粒 阳性反应程度标准如下： -胞浆无色 +胞浆呈粉红色，无颗粒 ++胞浆呈红色 +++胞浆呈暗红色 ++++胞浆呈紫红色，颗粒极密 （2）红细胞系统：幼红细胞和红细胞均呈阴性反应。红血病及红白血病时，幼红细胞甚至红细胞可出现阳性反应程度的标准如下： -胞浆无色或无红色颗粒 +胞浆呈粉红色或有少量细小红色颗粒 ++胞浆呈弥漫红色没有较粗大红色的颗粒 +++胞浆呈深红色或有粗大红色颗粒 ++++胞浆呈紫红色或有粗大块状红色颗粒 （3）单核细胞系统： 分化差原始单核细胞：阴性反应， 分化好原幼单核细胞：+阳性反应； 单核细胞：+到++阳性反应,有时在胞质边缘处,阳性反应颗粒较粗大。 （4）淋巴细胞：大多数淋巴细胞为阴性反应，少数淋巴细胞为阳性反应，阳性物质为红色颗粒状，背景清楚，反应程度的标准如下： -胞浆内无红色颗粒 +胞浆内有少数（9个）红色细颗粒 ++胞浆内有较多（9个）红色细颗粒 +++胞浆内有粗大红色颗粒或少数红色块状物质 ++++胞浆内有多数粗大红色颗粒，并有红色大块物质 （5）巨核细胞和血小板：巨核细胞为阳性反应，阳性反应物质为红色颗粒状。血小板为阳性反应，阳性反应物质为红色细颗粒状，有时为红色小块状 （6）其它细胞：浆细胞一般为阴性反应，少数可呈阳性反应，阳性反应物为红色细颗粒状；巨噬细胞可呈阳性反应，阳性反应物为红色细颗粒状 注意事项： 配制好的雪夫试剂应保存于暗冷处，如试剂变红不可再使用 思考与创新： PAS染色的临床意义 * * *