第一章 血液样本采集和血涂片制备.docVIP

血液样本采集和血涂片制备 血液生理概要 血液组成：由血细胞(红细胞、白细胞、血小板)和血浆组成 血浆：血液加抗凝剂后分离出来的淡黄色液体 血清：离体后的血液自然凝固析出的淡黄色透明液体 两者区别:血清缺少某些凝血因子，如凝血因子Ⅰ(纤维蛋白原)、Ⅱ(凝血酶原)、Ⅴ、Ⅷ等；血浆除钙离子外，含有其他全部凝血因子。 全血适用于临床血液学检查，如血细胞计数、分类和形态学检查等。 血浆适用于血浆生理性和病理性化学成分的测定，特别是内分泌激素测定，也适用于血栓与止血的检查。 血清适用于临床化学和临床免疫学检查。 血液理化性质： 血量：正常成人4-5L，约为70±10ml／kg体重，占体重的6%-8%，其中血浆占55%，血细胞占45%。 颜色：动脉血氧和血红蛋白含量较高，呈鲜红色； 静脉血还原血红蛋白含量较高，呈暗红色。 严重贫血者颜色变浅，严重一氧化碳或氰化物中毒者，呈樱桃红色。 pH：正常人7.35-7.45。动脉血为7.40，静脉血为7.35 血液比密：男性为1.055-1.063，女性为1.051-1.060。血浆为1.025-1.030，血细胞为1.090。血液比密与红细胞含量、血红蛋白含量有关，血浆比密和血浆内蛋白浓度有关。 血浆渗透压：290-310mOsm／(kg·H2O)。 血液特性：红细胞的悬浮稳定性、黏滞性、凝固性 生理功能：运输功能、协调功能、维护机体内环境稳定和防 御功能 采血方法 静脉采血法 皮肤采血法(曾称毛细血管采血法) 真空采血法(又称负压采血法)：采血装置分：套筒式、头皮静脉式 抗凝剂选择 抗凝：用物理或化学的方法除去或抑制血液中的某些凝血因子，以阻止血液凝固。 抗凝剂或抗凝物质：能够阻止血液凝固的物质。 常用抗凝剂和使用方法如下： 乙二胺四乙酸(EDTA)盐：常用有钠盐)(EDTA-Na2·H2O)或钾盐(EDTA-K2·H2O)，能与血液中钙离子结合成鳌合物，使Ca2+失去凝血作用，阻止血液凝固。EDTA盐对血细胞形态、血小板计数影响很小，适用于血液学检查，尤其是血小板计数。但钠盐溶解度低于钾盐，有时影响抗凝效果。国际血液学标准委员会(ICSH)建议CBC(全血细胞计数)抗凝剂用EDTA-K2·2H2O，量为1.5-2.2 Mg/ml血液。不适于凝血检查、血小板功能试验。 草酸盐：常用有草酸钙、草酸钾、草酸铵，溶解后解离的草酸根离子能与血液中钙离子形成草酸钙沉淀，是Ca2+失去凝血作用，阻止血液凝固。优点是溶解度好、价廉。对凝血因子Ⅴ的保护作用差，影响凝血酶原时间测定，而且草酸盐与钙结合后形成的沉淀物，影响自动凝血仪检测结果，因此，不适于凝血检查。双草酸盐抗凝剂：草酸钾可使红细胞体积缩小，草酸铵则可使红细胞胀大，二者按适当比例混合，恰好不影响红细胞形态和体积，可用于血细胞比容(Hct)、CBC、网织红细胞计数(Ret)等项目检查。可使血小板聚集、影响白细胞形态，不适于血小板计数、白细胞分类计数。 肝素：加强抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)灭活丝氨酸蛋白酶作用，阻止凝血酶的形成，并阻止血小板聚集等作用，从而阻止血液凝固，是生理性抗凝剂。广泛存在于肺、肝、脾等几乎所有组织和血管周围肥大细胞和嗜碱性粒细胞颗粒中，带有较多负电荷。常用肝素钠盐或钾盐，每毫升血液肝素用量为15±2.5U。优点是抗凝力强、不影响血细胞体积、不易溶血等。绝大多数检查都可用肝素作为抗凝剂，是红细胞渗透脆性试验的理想抗凝剂。但可引起白细胞聚集，瑞氏染色后产生蓝色背景，不适于CBC、细胞形态学检查。 枸橼酸盐：常用有枸橼酸钠，能与血液中钙离子结合形成螯合物，阻止血液凝固。但溶解度低，抗凝力不如上述抗凝剂。适用于红细胞沉降率、凝血检查，也是输血保养液的成分。与血液的抗凝比例为1：9(凝血功能的检查)或1：4(血沉)。 血液涂片制备 载玻片的清洁：新载玻片常带有游离碱质，必须用1mol/HCL浸泡24h，清水冲洗，干燥后备用。用过的载玻片可用适量肥皂或其他洗涤剂煮沸20min，趁热刷去血膜，清水冲洗，必要时蒸馏水浸泡，干燥后备用。要保持载玻片的清洁、干燥、中性、无油腻。 血涂片的制备：有手工推片法、载玻片压拉法、棕黄层图片法等。血涂片可用非抗凝静脉血或毛细血管血，也可用EDTA抗凝血液制备。EDTA抗凝血有时能引起红细胞皱缩和白细胞聚集，因此最好使用非抗凝血制备血涂片。 一张良好的血涂片，应厚薄适宜、头体尾分明、细胞分布均匀、血膜边缘整齐，并留有一定空隙。 血液细胞染色 血涂片在用光学显微镜观察前需要固定和染色。 固定：将细胞蛋白质和多糖等成分迅速交联凝固，以保持细胞原有形态结构不发生变