单克隆抗体(陈青)解剖.pptVIP

动物细胞融合与单克隆抗体 文笔中学 陈青 遭遇 眼镜蛇毒为混合型毒素，以神经毒为主，早期症状包括眼睑下垂、复视、吞咽困难，晕眩，继而逐渐出现呼吸肌麻痹。一般医治办法为使用抗蛇毒血清，如医治无效病人多于咬伤之后6-12小时死亡。死因多为呼吸麻痹而窒息。 舟山眼镜蛇 寻医缺药 抗蛇毒血清 被蛇咬后，蛇毒作为抗原进入机体。注射的抗毒血清中的有效成分抗蛇毒抗体能特异性结合蛇毒，形成复合物使毒素失去活性，并由吞噬细胞吞噬消化 。 所以被毒蛇咬伤，初步处理伤口后应在越短的时间里面注射抗蛇毒血清对机体越有益。 回顾：体液免疫 1.提取蛇毒 2.免疫马匹 3.采集血液 4.分离纯化 5.冷冻干燥 6.低温保存 疑问：为什么抗蛇毒血清那么难获得？ 其它的抗血清存在类似问题 用传统方法获得抗体存在问题： 生产难，周期长，产量少、纯度差，特异性低。 设想：能不能通过大规模培养浆细胞获得抗体 B淋巴细胞在抗原刺激下分裂分化形成能分泌抗体的浆细胞， 浆细胞主要分布在脾脏、淋巴结等组织中。 每一种B淋巴细胞只能能分泌一种特异性抗体，要想获得大量的特异性抗体，必须使能分泌该单一抗体的B淋巴细胞大量增殖。 困难：B淋巴细胞能分泌抗体不能无限增殖 浆细胞为终末分化细胞，它们寿命只有2-3D，只能由记忆细胞增殖分化为浆细胞进行补充，不能进行分裂增殖。 曙光：动物细胞融合 人们很早就注意到在自然条件下发生的细胞融合现象。首先在病理组织中发现了由细胞融合产生的多核细胞，紧接着发现在脊椎动物和无脊椎动物的正常细胞中也可发生细胞融合，随后在体外组织培养中也发现了离体细胞的融合现象。 1962年，日本科学家发现仙台病毒能介导癌细胞融合，从而打破了细胞融合的屏障，推动细胞融合技术跃上新的台阶。 1965年英国科学家成功地用灭活仙台病毒将体外培养的Hela细胞和小鼠艾氏腹腔积液癌细胞融合成一个杂交细胞，实现了异种细胞融合。表明异种动物细胞可融合成具有双方亲代细胞特性的杂种细胞。 骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合 能产生抗体 不能无限增殖 + B淋巴细胞 能无限增殖 不能产生抗体 ? 杂交瘤细胞 既能产生抗体 又能无限增殖 方案: 困难1：融合后获得的一定是杂交瘤细胞吗？ 从小鼠脾脏中获取 融合 第一次筛选：筛选杂交瘤 单克隆抗体 困难2：杂交瘤细胞一定能分泌单一抗体？ 抗原A 抗原B 抗原C 抗原 克隆A 克隆B 克隆C 多克隆抗体 B淋巴细胞 体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上，但是每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。从脾脏中获取B淋巴细胞，杂交后得到的杂交瘤细胞能分泌多种抗体。 第2阶段筛选：专一性抗体检测 困难3：如何大规模获得抗体？ Georges J.F. K?hler César Milstein 1975年Koehler和Milstein合作，选择经绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞和在体外培养的能持续繁殖的小鼠骨髓瘤细胞融合，最终获得具有两种亲本细胞各自特点的杂交细胞，建立了第一个B细胞杂交瘤细胞株，它既能分泌特异性抗绵羊红细胞抗体，又能在体外培养永久传代。他们在Nature杂志上联名发表的题为“分泌预定特异性抗体的融合细胞持续培养”的著名论文，宣告单克隆抗体的诞生，该项成果荣获1984年度诺贝尔医学奖和生理奖。 荣誉 运用：诊断试剂 人绒毛膜促性腺激素（HCG）是由受孕妇女体内胎盘产生的一种糖蛋白类激素，在孕妇的尿液中大量存在。而在非妊娠妇女尿液中几乎不含有HCG。 运用：生物导弹