三叶青提取物对人恶性黑色素瘤细胞A375的体外抑制作用..docVIP

浙江大学远程教育学院 本科生毕业论文（设计） 题 目 三叶青提取物对人恶性黑色素瘤细胞A375的体外抑制作用 专 业 药剂学 学习中心 海宁医学中心 姓 名 学 号 指导教师 张水利 2011 年 10 月 20 日 论 文 摘 要 随着人们生活水平的提高，人们对健康的重要性看的越来越重，但是同时随着工业化进程的加快，环境污染越来越严重，一些不治之症开始在我们身边不断出现，新增癌症患者逐年上升，抗癌，也成为人类和癌魔旷日持久的战争。癌症的治疗效果往往不够理想。目前治疗癌症常用的方法有：外科手术、放疗化疗和中医药治疗，但是外科手术、放疗化疗往往治标不治本，手术切除肿块，短期疗效可见，早期肿瘤切除后，可以获得临床治愈。但是手术无法切除肉眼不可见的微小病灶和转移扩散的癌症细胞，研究已经证明：手术会刺激癌症生长，加速癌症转移；放疗、化疗具有全身作用，对多种癌症有都一定的疗效，有够明显的缩小癌症，防治转移和复发，但副作用较大，尤其是对骨髓的抑制，使白细胞下降，具有一定的风险。中医中药治疗癌症对于减轻癌症病人的症状和痛苦，提高生存质量，延长生命，降低癌症死亡率，都有其重要的意义：副作用小、经济上比较便宜、弥补手术放化疗的不足等优点。 关键词：　三叶青，人恶性黑色素瘤A375细胞，体外抑制 目 录 引　　　言 三叶青提取物是否真的对肿瘤细胞起作用，本文将通过具体实验来论证，为今后抗肿瘤活性成分的研究提供科学依据。方法：采用MTT比色法，测定三叶青提取物对A375细胞活性抑制作用的时效、量效关系；光学显微镜法观察其对细胞形态的影响。结果：三叶青提取物以125 mg/L的浓度与A375细胞共同培养，在48h对细胞活性的抑制最为显著；不同浓度的三叶青提取物和A375细胞共同培养，乙酸乙脂、三氯甲烷部位对A375细胞活性有显著性影响，且呈浓度依赖性。光学显微镜下可见典型凋亡细胞形态学改变。结论：三叶青提取物对A375细胞具有明显的体外抑制作用。 一、材料与方法 （一） 材料 1、 三叶青原料 三叶青饮片产自云南，购自宁波鄞州医药药材公司，经浙江医药高等专科学校实验师鉴定为Tetrastigma hemsleyanum Diels et. Gilg。 2、 细胞株 人恶性黑色素瘤细胞株A375购自上海中科院细胞生化所。 3、 试剂与仪器 MTT [3-（4，5-Dimethylthiazol-2-yl）-2，5-diphenyltetrazolium bromide]：美国Amresco公司；RPMI 1640培养液：美国Invitrogen公司，批号胎牛血清：上海蓝季科技发展有限公司，批号胰岛素：上海蓝季科技发展有限公司，批号5-氟尿嘧啶注射液：天津金耀氨基酸有限公司，批号 酶标仪：美国Bio-Rad公司；倒置生物显微镜：Motic实业集团有限公司；CO2培养箱：力康生物医疗科技控股有限公司。 （二） 方法 1、 三叶青提取物制备 三叶青饮片，95 %乙醇回流提取3次，每次1小时，60%乙醇乙醇回流提取3次，每次1小时，合并提取液，过滤，减压浓缩得乙醇浸膏，用少量水将乙醇浸膏分散，依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶剂后，得到石油醚部位、三氯甲烷部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位。 2、 三叶青提取物溶液制备 取三叶青乙醇提取物适量，用1 mL DMSO溶解，用含10 %（体积分数）灭活新生小牛血清RPMI-1640培养液稀释，分别配制成20、100、500、2500 mg / L溶液，备用。石油醚部位、三氯甲烷部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位同法操作，分别配制成20、100、500、2500 mg / L溶液，备用。 3、 阳性对照溶液制备 精密量取5-氟尿嘧啶注射液适量，加入1 mL DMSO，用含10%灭活新生小牛血清RPMI-1640培养液稀释，分别配制成20、100、500、2500 mg / L溶液，备用。 4、 细