布拉氏酵母菌对溃疡性结肠炎炎性细胞因子影响.docVIP

布拉氏酵母菌对溃疡性结肠炎炎性细胞因子影响 　　【摘 要】目的：探讨布拉氏酵母菌对溃疡性结肠炎细胞因子影响。方法：采用乙酸大鼠结肠炎模型， 观察灌肠后大鼠每日腹泻、血便及体重变化，结肠大体及光镜下结肠黏膜TNF-α、NF-κB、IL-10的表达。结果：中高剂量组表现为饮食量和体重增加，无血便，低剂量组有2只大鼠少量血便，体重不增加。联合用药可有效降低结肠黏膜TNF-α、NF-κB，并提高IL-10的表达，联合用药比单独用药效果更佳。结论：布拉氏酵母菌通过改变炎性细胞因子治疗溃疡性结肠炎，中等剂量效果明显，联合用药效果更佳。 　　【关健词】布拉氏酵母菌；溃疡性结肠炎；细胞因子 　　【中图分类号】R57 【文献编识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）03-0160-02 　　近年来药物联合益生菌治疗溃疡性结肠炎（UC）取得较好效果。为明确益生菌与细胞因子在UC发病中的关系，我们采用乙酸大鼠结肠炎模型，应用不同剂量布拉氏酵母菌治疗，观察大鼠结肠黏膜组织学和细胞因子（TNF-α、NF-κB及IL-10）的变化，寻找其最佳治疗剂量，同时进一步阐明布拉氏酵母菌的治疗作用机制 　　一、材料与方法 　　1.实验动物：雄性SD大鼠42只，体重（215±8）g，购自新乡医学院实验动物中心。 　　2.主要试剂和药物： 布拉氏酵母菌 （法国百科达制药厂，0.25g/袋，每袋含有5×109 cfu布拉酵母菌活菌）治疗。柳氮磺胺吡啶（SASP）系山西省三九同达药业公司。NF-κB试剂盒，Santa Cruz工程公司提供。TNF-α试剂盒，北京中山生物技术公司提供。IL-10试剂盒，武汉博士德生物工程公司提供。 　　3.实验设计： 大鼠均分为7组，分别为对照组、模型组、布拉氏酵母菌高剂量组（5×109CFU），中剂量组（2.5×109CFU），低剂量组（1.25×109CFU），SASP组（52.5 mg/200 g体重）及联合用药组（SASP 52.5mg/200 g体重+布拉氏酵母菌2.5×109CFU）。动物模型：对照组大鼠以2 ml生理盐水经导管导入结肠，余六组大鼠以8%乙酸2 ml经导管导入结肠造模，3 d后，对照组和模型组大鼠每天给2 ml生理盐水灌胃，余各组给予不同剂量的布拉氏酵母散或SASP溶液灌胃每天1次，其中联合用药组上午8时以52.5 mg/200 g体重SASP溶液、下午4时以2.5×109CFU剂量布拉氏酵母散。10 d后将各组大鼠用2%戊巴比妥0.2 ml/100 g体重腹腔注射麻醉，腹正中切口， 各组均取部分结肠，肉眼和光镜下观察结肠黏膜。 　　4.免疫组化染色：单克隆抗体TNF-α、IL-10、NF-κB，一抗稀释浓度分别为1∶100、1∶100、1∶150，采用SP法检测。以正常血清代替一抗作阴性对照。 　　5.观察指标：①灌肠后大鼠每日腹泻、血便及体重变化情况，并记录大鼠的一般情况；②结肠大体病理并行结肠黏膜光镜下观察；③结肠黏膜中TNF-α、NF-κB、IL-10的表达。 　　6.计数标准：采用图像分析技术，随机选择5个视野，取光镜下每平方毫米（10×40）中的平均阳性细胞数，以均数±标准差表示。 　　7.统计方法：所得数据用SAS 8.0软件处理，计量资料多组间比较行方差分析，各组间两两比较行LSD检验。 　　二、结果 　　1.模型组大鼠的结果：模型组大鼠在灌肠后的1～3 d内出现不同程度的血性腹泻、少动、饮食量减少、体重下降；病变结肠水肿，肠壁增厚，红斑和溃疡。镜下见黏膜隐窝脓肿、杯状细胞消失，固有层中性粒细胞、淋巴细胞浸润。对照组大鼠则反应灵活、饮食量正常、体重增加；结肠黏膜无病理变化；模型组大鼠结肠黏膜TNF-α、NF-κB高于正常对照组，IL-10低于正常对照组，差异均有统计学意义（P0.05，0.01），见表1。 　　2.布拉氏酵母菌的作用：一般情况：中高剂量组表现为饮食量和体重增加，无血便，低剂量组有2只大鼠仍有少量血便，体重增加不明显。结肠黏膜大体结果：模型组大鼠结肠黏膜充血水肿，有多个溃疡。低剂量组有2只尚有少许溃疡未完全愈合，其余4只可见溃疡愈合的痕迹。中高剂量布拉氏酵母菌组可见溃疡愈合痕迹。病理切片：模型组有溃疡形成，肠黏膜上皮细胞坏死脱落，杯状细胞减少，黏膜下淋巴细胞增生并有淋巴滤泡形成，有少量中性粒细胞浸润。低剂量组结肠黏膜上皮有糜烂，黏膜下淋巴细胞增生。中高剂量组结肠无溃疡，黏膜固有层内有少量淋巴细胞、浆细胞、嗜酸性粒细胞浸润、个别腺腔有灶性上皮坏死。细胞因子表达：不同剂量均可降低肠黏膜TNF-α、NF-κB，提高IL-10，但均未达到正常对照组水平，见表1。中剂量能在一定程度上起到治疗作用，且在病理上达到溃疡愈合，因此认为中剂量为治疗UC