实验一 PCR课件.pptVIP

聚合酶链式反应（PCR） PCR的定义 PCR（polymerase chain reaction) ： 聚合酶链式反应，又称体外DNA扩增技术。 近年来发展起来的一种体外扩增特异DNA片段的技术。 PCR的成分和作用：终浓度 1. 缓冲液 10 ～ 50 mM Tris- Cl (pH8.4) 维持 Taq 酶作用环境的偏碱性 25 ～ 50 mM KCl 促进引物退火，50 mM 会抑制 Taq 酶的活性。 100μg / ml 牛血清白蛋白 (BSA) 对酶有一定的保护性，如质量不好将起相反的作 用，建议使用乙酰化的 BSA。明胶、Tween-20、 二硫苏糖醇 (DTT) 也有类似作用。 2. MgCl2 1.5 ～ 2.0 mM Taq 酶具有 Mg2+依赖性，显著影响反应的特异性和扩增片段的产量，过量能增加非特异扩增并影响产率，过低则酶活性显著下降。 3. dNTPs dATP、 dGTP 、dCTP、dTTP——底物 0.02 ～ 0.2 mM