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碱性磷酸酶Km值的测定 底物浓度对反应速率影响 在其他因素不变的情况下，底物浓度对反应速率的影响呈矩形双曲线关系。 Ｋm值与Ｖmax值的测定 双倒数作图法 注意事项 1 底物和酶取样准确 2 保温时间准确 实验报告 1 绘制矩形双曲线图 2 绘制双倒数图，并通过双倒数图读出碱性磷酸酶对磷酸本二钠的Km值 注意事项 1 做如下表格 2 可电脑作图 3 若人工作图，在坐标轴上禁止出现分数(1/2,1/16) 4 实验的最终目的是测得Km值，因此实验报告最终必须得出结论：Km值等于多少 * 底物浓度 酶浓度 pH 温度 激活剂 抑制剂 ※ 研究一种因素的影响时，其余各因素均恒定。 影响 酶促反应的因素 [S] V [S]：底物浓度 V：不同[S]时的反应初速度 Vmax：最大反应速度(maximum velocity) Ｋm：米氏常数(Michaelis constant) Ｖ Vmax[S] Km + [S] ＝ ── Km值 ① Km等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度。 ② 意义： a) Km是酶的特征性常数之一； b) Km可近似表示酶对底物的亲和力； c) 同一酶对于不同底物有不同的Km值。 Km Km＝[S] 2 ＝ Km + [S] Vmax Vmax[S] Vmax V [S] Km Vmax/2 Vmax[S] Km+[S] V = （林－贝氏方程） + 1/V= Km Vmax 1/Vmax 1/[S] 两边同取倒数 5 加入碱性溶液 终止反应的 时间 加入酶的时间 7 6 4 3 2 1 9:00:00 9:00:30 9:01:30 9:02:00 9:02:30 9:03:00 9:01:00 9:15:00 9:15:30 9:16:00 9:16:30 9:17:00 9:17:30 9:18:00 保证每个试管的反应时间为15分钟 5 1/[S] 1/ABS [S] Abs 7 6 4 3 2 1 *
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