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概述
CELL – DYN 3200用于测量、计数和计算血液学参数的原理,在本单元“样本分析循环概述”和“介绍流式细胞计数”中论述。随后的内容讨论了针对白细胞、红细胞、血小板、和HGB的测量步骤。在最后的子单元“操作信息与数据报警”中,讨论了由于所测得的参数超出先前限定的范围之外、样本变态、测量过程中发生干扰、或者探测到变态成分时由设备生成的报警。质量控制方法在第11单元—“质量控制”中论述。网织红细胞与网织红细胞报警在第14单元—“网织红细胞程序包”中论述。
在CELL – DYN 3200中所使用的两个独立的测量通道是:
● 用于测定白细胞、NOC、和红细胞 / 血小板数据的光学通道。● 用于测定HGB的血红蛋白通道
在每一次设备循环过程中,在测量每个参数之前,样本都经过吸样、稀释和混合的步骤。
注意:在R红细胞和F白细胞模式中会发生报警增多的现象。
吸样
在CELL – DYN 3200上有两种模式的全血吸样。操作人员从RUN(运行)屏幕中选择吸样模式。
●Open Sampler Mode(开放式进样装置模式)用于从一个已经打开的并置于开放式吸样针下的收集管中吸样。
●Closed Sampler Mode(封闭式进样装置模式)用于通过穿刺试管管塞的方式直接从一个闭合的收集管内吸入血液样本。
吸样剂量为:
开放式模式 150 μL ± 10%
封闭式模式(CS) 240 μL ± 10%
自动进样装置(SL) 240 μL ± 10%
一旦选定了吸样模式,凭借真空 / 压力作用全血样本被吸入至分液阀。位于分液阀上流端的一个超声波传感器会在血样进入分液阀之前检查其完整性。位于分液阀下流端的一个发光二极管传感器会检查血样以确保正确剂量的血样被传送通过分液阀。
样本分析循环概述
注意:本文中列出的样本和试剂剂量表示象征性的数值。设备间微小的差异可能引起这些剂量会随之改变。这些差异由出厂设置的内部稀释因素所弥补。
吸样
以开放式模式或者封闭式模式吸样并将其传送至分液阀。开放式模式中的样本剂量为150 μL。封闭式模式中的样本剂量为240 μL。
样本片断
为了分离三份剂量的吸入全血样本旋转分液阀。三份剂量为:
20 μL 用于白细胞稀释
1.67 μL 用于红细胞/血小板 稀释
12 μL 用于血红蛋白 稀释
红细胞/血小板 1.67 μL剂量的红细胞/血小板一起被转移至红细胞混合装置内。
2.然后将片断和稀释液传送至红细胞 / 血小板混合装置,在那里以漩涡作用混合稀释液。最终稀释液的比例为1:1675。
3.样本转移泵将红细胞 / 血小板稀释液从红细胞 / 血小板混合装置中转移至光学流动池样本入口喷嘴处。
4.以恒定压力下在鞘液池内将稀释液 / 鞘液试剂引入激光流式细胞仪。
5.随后,样本测定注射器将24 μL的红细胞 / 血小板稀释液注入流动池内,其注射压力(和速度)低于稀释液 / 鞘液试剂的压力(和速度)。
6.围绕在红细胞 / 血小板稀释液周围的鞘液速度越高,汇集红细胞 / 血小板稀释液的流动池的特定几何学意义越明显,因此即可以逐个计数个体流动池。
7.一束激光聚焦在流动池上。当样本流截断激光束时,在0度、10度和90度处测量被分散的光束用于红细胞,在0度、10度处测量用于血小板。
血红蛋白分析
1.稀释液 / 鞘状针管将1.7 mL的稀释液分配至分液阀,穿过分液阀与12 μL剂量的HGB一起被转移至HGB流动池内。
2.在稀释液将HGB液样转移至HGB流动池后,HGB溶解针管将0.9 mL 的HGB 溶解产物分配至行内。HGB溶解产物的入口点位于分液阀和HGB流动池之间。
3.将片断、溶解产物和稀释液传送至HGB流动池,在那里以漩涡作用混合稀释液。最终稀释液的比例为1:218。
4.将一个低能量发光二极管连在HGB流动池上以测量555纳米处的光吸收值。该吸收值与样本的HGB浓度成比例。
白细胞
按照下列方法视觉分析白细胞
1.白细胞0.973 mL 的白细胞20 μL的 白细胞白细胞
2.然后将片断和试剂传送至白细胞,在那里以漩涡作用混合稀释液。最终稀释液的比例为1:50。经稀释的样本在混合舱内停留14秒钟以供红血球溶解。
3.样本转移泵将白细胞从白细胞混合装置内转移至激光流式细胞仪样本入口喷嘴处。
4.以恒定压力下在鞘液池内将稀释液 / 鞘液试剂引入激光流式细胞仪。
5.随后,样本测定注射器将46.5 μL的白细胞稀释液注入流动池内,其注射压力(和速度)低于稀释液 / 鞘液试剂的压力(和速度)。
6.围绕在白细胞稀释液周围的鞘液速度越高,汇集白细胞稀释液流的流动池的特定几何学意义越明显,因此即可以计数个体流动池。
7.一束激光聚
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