病毒与健康3-病毒的纯化、检测1.pptVIP

病毒的纯化、检测和病毒病的诊断方法 病毒的纯化 Stanley 在1935年首次提纯TMV 病毒纯化对病毒学发展所起的作用十分巨大. 病毒的纯化前的预备工作 1.繁殖病毒 自然感染病毒的生物体的器官组织或细胞 的量往往难以满足提纯需求,需要用人工接 种寄主来大量繁殖病毒. 病毒的纯化前的预备工作 首先要选择最适合的寄主 对植物病毒,长期以来都是接种整体植物 一般说,用机械摩擦接种比昆虫媒介或嫁接等方法简便. 病毒的纯化前的预备工作 利用生物学方法纯化病毒 采集自然感染的生物体组织器官作原材料来提纯某种病毒时,混合感染的概率很大 生物学纯化:病毒在很多植物或动物细胞上产生一个个单个病毒株体 病毒的纯化前的预备工作 病毒纯化的基本原理 病毒的释放和萃取 病毒颗粒主要存在与寄主组织细胞内,因此提纯的第一步是设法破碎寄主感病的细胞 病毒纯化的基本原理 大多数病毒毒粒的等电点在PH4.0左右,而最稳定、溶解度最大是在PH7.0左右 此时可用0.1mol/L磷酸缓冲液来处理 一般破碎细胞、萃取以及以后各提纯步骤都在4℃左右进行操作。 病毒萃取液的分级纯化 清除较大的细胞器 去除较大的细胞组分如：细胞核、线粒体、叶绿体和细胞壁等 病毒萃取液的分级纯化 去除寄主蛋白质 1、沉淀法 用各种沉淀剂来沉淀，最常用的是硫酸胺，其溶解度高，更经济。 不同饱和度的硫酸胺可沉降水合化程度不同的病毒或蛋白质