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Superdex 75 Superdex 200 前言 Superdex? 75 10/300 GL和 Superdex 200 10/300 GL均是 Tricorn? 高效柱。该柱子是用于高效过滤分离蛋白、多肽、小于200bp的DNA片段及其他生物分子的预包装玻璃柱子。 该柱子有两个手拧接头1/16，一个用于接AKTAdesign?系统，与一个1/16 female/M6 male一起接FPLCTM系统。 柱子相关数据 基底 柱床尺寸 柱床体积 柱效率（N/M） 平均粒度 通常使用时pH稳定范围 清洗时pH稳定范围 工作时温度 储藏温度 复合交联琼脂糖和右旋糖酐 10 × 300–310 mm 大约24ml 30 000 m -1 13um 3-12 1-14 4-40℃ 4-30℃ Superdex 75 Superdex 200 球状蛋白的排阻极限 约为1×105 约为1.3×106 球状蛋白最佳分离范围 3000-70000 10000–600000 右旋糖酐 500–30000 1000–100000 推荐最大流速（水，室温下） 1.5ml/min 1ml/min 柱内最大压力 1.8Mpa，18bar，261psi 1.5MPa,15 bar,218 psi 初次使用 图一 展示如何锁接头器。黑色的锁环必须在下防止柱床高度的改变。 将柱子连接柱层分析仪之前，要确保管道与阀门处没有气泡。将注资上的储存/输送装置及止塞移除。检查上方的接头器是否锁上（将锁环压下去，见图一）。确认柱子的进口已经注满液体，并且一级级接入系统。 平衡后第一次使用或长期存储如下 至少用50ml蒸馏水在0.5ml/min的速度下清洗 50ml洗脱液在0.5ml/min流速下洗涤 确保其回压不超过推荐的最大压力值。 先以以下条件试一下 洗脱液 50mM磷酸缓冲液（PBS） 0.15M Nacl，pH 7.0 流速 室温下，0.5-0.75ml/min 样品体积 25ul 在同样的洗脱缓冲液中就没必要平衡了，认真阅读“优化”这一部分了解如何优化蛋白分离。 缓冲液与耐溶剂 在喷射阀前安装一个滤器。如果缓冲液与溶剂有增强粘性，那会影响负压与流速。所有的溶剂全都要经过脱气与0.22um滤器过滤。 日常使用 所有常用缓冲液，pH均在3-12之间 尿素 8M 乙腈 达到缓冲液的30% 离子型和非离子型洗涤液 盐酸胍 6M 三氟乙酸 10% 甲酸 70% 洗涤液 乙腈 30% 氢氧化钠 1M 乙醇 70% 甲醇 100% 乙酸 1M 异丙醇 30% 盐酸 0.1M 禁止：氧化物剂 未过滤溶液 建议样品状态 分子量 3000-70000 （75） 10000-600000（100） 蛋白浓度 样品中蛋白≤10mg 样品体积 25-500ul 准备 将样品溶解于洗脱液，用0.22um的旅途过滤除菌或10000g离心10min。 深入信息 运输/储存 柱子有一个储存/运输装置来保证柱内压，同时防止柱子干掉。柱子用脱气的20%的乙醇平衡。 如果柱子后后需要储存2天之上，用2倍柱体积的蒸馏水洗涤，后用制定好2倍柱体积的20%乙醇洗涤。在此提醒要按图一将储存/ 运输装置连接好以便长期储存。 玻璃管用一塑料保护膜套起来，会有少量空气存留在玻璃跟塑料保护膜之间。 如何除去其存储/运输设备 （见右图） 按下弹簧帽 移去锁定栓 松开帽，把装置拧开 如何重装该装置(见右图) (1)在储存或运输装置上接一个注射器或泵，并且往里注入20%的乙醇，超过管子上的刻度线即可。把注射器或泵移除。 (2)赶净气泡后，将柱塞压到柱上的刻度线处。 如何连接储存/运输设备（见右图） 在柱子的进出口接头处注入20%的乙醇，将装好的装置逐级连接在柱子顶部。 （2-3）附上弹簧帽，用锁栓固定 洗脱液的选择 选择一种保证样品完全溶解的洗脱液。也尽量选择一个简化下游应用程序洗脱液mM 磷酸钠 0.15M氯化钠 pH7.0的缓冲液。表一列出了一些常用的洗脱液组分。 表一 常用洗脱液组分 pH 洗脱液液或缓冲液 特性/应用实例 5.0 0.1M醋酸铵 7.2 0.05M磷酸盐+0.15M氯化钠 生理状态 7.8 0.15M碳酸氢铵 适用于分离DNA与蛋白；不稳定