第2章紫外-可见分光光度法讲述.ppt

（2）单色器 由入射狭缝、准光器（透镜或凹面反射镜使入射光成平行光）、色散元件、聚焦元件和出射狭缝组成。 核心部分：色散元件，将复合光色散成单色光 色散元件为棱镜和光栅。 （3）吸收池 紫外及可见光区：石英比色皿 可见光区：光学玻璃比色皿(吸收紫外光) 注意：不能用手拿光学面；放入试样室时必须用滤纸（或镜头纸）吸干外面的溶液；盛溶液时只装2/3。 （4）信号接收器 光电管、光电倍增管。 （5）读出装置 数字显示、记录仪、表头等。 2．分光光度计类型 ①单波长单光束分光光度计： 一般分光光度计 0.575 光源 单色器 吸收池 检测器 显示 ②单波长双光束分光光度计：在单色器后采用光束分裂器将光束分为强度相等的两束光；一束通过参比池，另一束通过样品池。可消除光源强度变化带来的背景误差 比值 光源 单色器 吸收池 检测器 显示 光束分裂器 样品池 参比池 §2-4 分析条件选择 一、仪器测量条件 误差来源： 光源不稳定、实验条件偶然变动、读数不准确等 选择适宜的吸光度范围（0.15~1.00)，使测量结果的误差尽量减小。 通过调节待测溶液浓度，选用适当厚度的吸收池使A落在此区间内。 选择最大吸收波长为入射光波长（最大吸收原则），灵敏度最高。 二、显色反应与分析条件选择 1 显色反应 2 反应条件确定 3 测定中干扰及消除 显色反应选择 灵敏度高，一般ε104 选择性好 显色剂在测定波长处无明显吸收。 对照性好, 显色剂与有色配合物?λmax60 nm 反应生成的有色化合物组成恒定，稳定。 显色条件易于控制，重现性好。 M + nR = MRn (R: 显色剂) 反应条件确定 （1）显色剂用量 M + nR = MRn 显色剂用量通过实验确定，作A随显色剂浓度变化曲线，选恒定A值时的显色剂用量。 （2）溶液酸度影响 最佳酸度通过实验确定，固定溶液中待测组分与显色剂浓度，改变pH值，测定A与pH关系，找出最适宜pH范围。 (R: 显色剂) （3）其它问题 显色反应时间、温度、放置时间对配合物稳定性的影响。 三、参比溶液的选择 用参比溶液调节透射比为100％（A=0），以消除溶液中其它成分以及吸收池和溶剂对光的吸收所带来误差 1、溶剂参比 当试样溶液组成简单、共存其它组分很少且对测定波长的光几乎没有吸收时，采用溶剂参比，可消除溶剂、吸收池影响 2、试剂参比 如显色剂或其它试剂在测定波长有吸收，按显色反应相同条件，只是不加试样，同样加入试剂和溶剂为参比。可消除试剂中组分产生吸收的影响 四、干扰及消除方法 控制酸度、选择适当的掩蔽剂、选择适当的测定波长、分离等。 §2－5 紫外-可见分光光度法应用 —定性、定量、结构分析 1．定性分析 比较吸收光谱 在相同测量条件下，测定未知物的吸收光谱与所推断化合物的标准物吸收光谱直接比较。如吸收光谱形状完全一致（λmax，吸收峰数目、位置及ε等）。可初步认为是同一化合物。 2．有机化合物构型、构象的测定 顺反异构体的判别： 反式异构体λmax和ε都大于顺式（二苯乙烯：反式 295nm, 27000; 顺式280nm,10500）； 3．定量分析 （1）单组分分析：标准曲线法或标准对比法 标准曲线法：配制一系列不同含量的标准溶液，以不含被测组分的空白溶液为参比，在相同条件下测定标准溶液的吸光度。绘制标准曲线。在相同条件下测定未知试样的吸光度，从标准曲线上找到与之对应的未知试样的浓度。建立一个方法时，首先要确定符合朗伯-比尔定律的浓度范围，即线性范围，定量测定一般在线性范围内进行。 标准对比法：在相同条件下测定试样溶液和某一浓度的标准溶液的吸光度Ax和AS, 由标准溶液的浓度cs 可计算出试样中被测物浓度cx 该方法较简单，但只有在测定的浓度范围内溶液完全遵守Lambert-Beer定律，且cs 和cx 很接近时，才能得到准确的结果。 （2）多组分分析： 根据A具有加和性，在同一试样中可测定两个以上组分。假如试样中含x, y两种组分，在一定条件下将它们转化为有色化合物，分别绘制吸收光谱，出现三种情况 (a): 两组分互不干扰，分别在λ1和λ2处测量A，求出x与y浓度 (b): 组分x对组分y的测定有干扰，但y对x无干扰。先在λ1处测量溶液的A λ1并求得x组分浓度。然后再在λ2处测量溶液A λ2x+y和纯组分x和y的ελ2x 和ελ2y值，根据A加和性原则： 即可求得y组分的浓度cy (c): 两组分相互干扰，首先在λ1处测定混合物的吸光度A λ1x+y和纯组分x和y的ελ1x 和ελ1y。然后在λ2处测定混合物A λ2x+y和纯组分x和y的ελ2x 和ελ2y。根据A加