4测序技术概述.ppt

基因与分子标记的共分离 共分离：位于特定基因附近的限制性标记，与突变表型密切相关，呈共分离现象。 比较患病者和正常人的DNA 限制图谱，发现一个特定的限制性位点通常出现(或者丢失)在患者DNA 中，限制性标记与表型间100%相关 表明：限制性标记与突变基因距离很紧，以至于它们在重组中不能分离 人类遗传图 人类基因组计划的最初目标---完成一份遗传图，其密度至少为每1000kb 一个标记 1994年完成，密度达到600kb一个标记 含有5264个微卫星序列 不久，一份物理图也随之问世，其密度为每100kb一个标记 含有7000个微卫星序列 遗传图的分辨率有限：基因组大，人类及大多数高等真核生物不可能获得大量的子代，最好的人类遗传图标记密度平均为599kb，不能指导基因组测序（100kb） 遗传图的精确性低：重组热点，染色体的某些位点之间比其他位点之间有更高的交换频率 物理图谱 限制酶作图 基于克隆的基因组作图 荧光原位杂交（FISH） 序列标记位点（STS) 人类基因组物理图 样品中仅存在较少的限制性位点/小分子量DNA分子，用常规的限制酶即可绘制物理图 稀有切点限制酶 限制性作图 稀有切点限制酶 特殊的凝胶电泳技术：脉冲凝胶电泳PFGE（电场方向不断变换） 啤酒酵母基因组 构建粘粒文库 建立克隆重叠群