医学免疫学实习指导.docVIP

目录 免疫学实验的目的和要求 2 实验室规则 2 第一篇 非特异性免疫检测 3 实验一 血脑屏障作用 3 实验二 吞噬细胞的功能试验 4 实验三 溶菌酶的溶菌作用 7 实验四 血清总补体活性测定（CH50单位测定） 9 第二篇 特异性体液免疫检测 11 实验五 凝 集 反 应 11 实验六 沉淀反应 17 实验七 补体结合反应 25 实验八 中和实验（ Neutrlization test ） 29 实验九 免疫标记技术 33 实验十 免疫血清的制备及效价测定 40 实验十一 体外抗体形成细胞检查法（溶血空斑实验 PFC） 43 第三篇 细胞免疫检测 46 实验十二 E-玫瑰花环形成实验 46 实验十三 淋巴细胞转化实验 48 第四篇：免疫病理反应 52 实验十四 豚鼠速发型过敏反应 52 实验十五 免疫复合物型超敏反应 53 实验十六 豚鼠结核菌素试验 55 实验十七 小鼠 DNFB 试验 56  免疫学实验的目的和要求 ? 每次实验前必须做好预习，明确本次实验的目的、内容、操作要点和相关的理论知识。 ? 进入实验室必须严格遵守实验室规则。 ? 实验中听从老师指导，依照三严（严肃、严格、严密）要求进行实验，做好实验记录。 ? 认真观察分析实验结果,写出实验报告。实验中遇到的有关问题,用科学的态度总结探讨其原因,培养分析问题和解决问题的能力。 实验室规则 ? 进入实验室必须穿好白大衣。 ? 除实验中必须的学习用品外，不要放实验台上。 ? 实验室内不允许吃食品、饮水，严禁吸烟。 ? 实验中一定要保持实验室安静，不要大声喧哗，严禁打闹。 ? 实验要按老师要求操作，如发现问题要及时报告指导老师。 ? 爱护实验器材，如有损坏应及时报告老师，需赔偿者按规定办理。 ? 实验完毕要清理台面，需冲洗者按要求冲洗，需收回者按要求摆放整齐收回。 ? 离开实验室时，一定要有专人负责关好门窗、水源及照明设备。  第一篇 非特异性免疫检测 实验一 血脑屏障作用 [基本原理] 血脑屏障由软脑膜、脉络丛的毛细血管壁和包在壁外的神经胶质细胞形成的胶质膜构成，起着天然的屏障作用，可以阻挡病原微生物及毒性产物、异物颗粒包括染料颗粒等从血流进入脑组织和脑脊液内，从而保护中枢神经系统免受损害。 [实验材料] 2只小鼠 。 1ml无菌注射器（配4号针头）。 5%台盼蓝水溶液。 生理盐水 0.1ml。眼科剪子和镊子等。 [实验方法] ? 用 1ml无菌注射器吸取5%台盼蓝水溶液经尾静脉注入两只小鼠体内，每只0.7ml，更换注射器，给其中一只小鼠颅内注射生理盐水0.1ml。 ? 5-10分钟后观察小鼠皮肤，尤其是眼、嘴的颜色变化。 ? 于 30-60分钟，见小鼠眼、嘴呈现蓝色，即窒息死亡，腹部向下固定。 ? 由头到尾沿背中线剪开皮肤，暴露皮下、肌肉和内脏，观察颜色变化。 ? 小心剖开颅骨和椎骨，暴露脑和脊髓，与皮下、肌肉及内脏比较；并比较 2只小鼠有何不同。 [实验结果] 未经颅内注射的小鼠，眼、耳、鼻皮下及肌肉均呈现明显的蓝色，但脑、脊髓均未变色；而经颅内注射的小鼠上述部位可呈现明显的蓝色。 [注意事项] ? 台盼蓝水溶液要经过滤后方可使用。 ? 尾静脉注射要从远断进针；如推注容易，表明进入了血管；如引起皮下凸起或发白，说明未进入了血管；拔出针头，从稍近断进针。 （谢 明）  实验二 吞噬细胞的功能试验 巨噬细胞能吞噬鸡红细胞、中性粒细胞可吞噬多种细菌，如葡萄球菌等。将巨噬细胞和中性粒细胞分别与鸡红细胞、表皮葡萄球菌混合，孵育一定时间后涂片染色镜检；见巨噬细胞可吞噬鸡红细胞；中性粒细胞可吞噬葡萄球菌，可计算出吞噬异物的细胞数和吞噬细胞中吞入的异物数。在巨噬细胞中亦可见到鸡红细胞发生形态改变。具此可判断两类吞噬细胞的吞噬功能和消化功能，用以评价机体的免疫状态。 [实验目的] 证实吞噬细胞的吞噬作用。了解机体的非特异免疫防护作用。 一、 豚鼠腹腔巨噬细胞吞噬作用測定（大吞噬） ： [基本原理] 淀粉可以刺激豚鼠腹腔引起非感染性炎症滲出，在腹腔局部出现较多巨噬细胞，巨噬细胞则能吞噬注入腹腔的鸡红细胞等较大异物。 [实验材料] ? 实验动物：豚鼠 ? 鸡红细胞悬液：从鸡翼下静脉或心脏取血，按 1 : 5比例保存于Alsever氏保养液中，放4 C°冰箱可用1个月，用前将鸡红细胞用生理盐水洗3次，第3次洗涤 2000r/min,5min，弃上清，压积细胞用生理盐水配制为5%鸡红细胞悬液，供大吞噬试验用。 ? 5%淀粉肉汤溶液、姬姆萨染液、玻片、注射器等。 [实验方法] ? 取无菌 5%淀粉肉汤溶液5ml注入豚鼠腹腔，常规饲养三天；实验前1小时再次注入豚鼠腹腔无菌5%淀粉肉汤溶液5ml，然后注射5%鸡红细胞悬液5ml，轻揉其腹部，使鸡血球均匀