血清谷丙转氨酶活性的测定(改良赖氏法)-song.pptVIP

血清谷—丙转氨酶活性的测定（改良赖氏法） 【目的要求】 1.掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原理。 2.熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操作方法。 3.了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义。 【实验原理】 血清中的谷-丙转氨酶（ALT/GPT），在37℃、pH7.4的条件下，可催化基质（底物）液中的丙氨酸与α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸： 在紫外分光光度计中，1ml血清(反应溶液总量为3ml)在340nm波长下，用内径为1.0cm的比色皿，在25℃，1分钟内生成的丙酮酸，在乳酸氢酶催化下，使NADH+H+变成NAD+，使光密度下降0.001为1个转氨酶活性单位。 卡门氏单位的定义为： 丙氨酸 + α-酮戊二酸 谷氨酸 + 丙酮酸 GPT 乳酸氢酶 NAD+ +乳酸 NADH+H+ 丙氨酸 + α-酮戊二酸 谷氨酸 + 丙酮酸 GPT 乳酸氢酶 NAD+ +乳酸 NADH+H+ 改良赖氏法 显色反应 分光光度法 赖氏法没有制定自身的单位定义，而是以实验数据套用卡门氏单位作表示的。 丙酮酸可与显色作用的2,4二硝基苯肼发生加成反应，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，在碱性环境中生成红棕色的苯腙硝醌化合物，其颜色的深浅在一定范围内与丙酮酸的生成量，亦即与ALT活性的高低成正比关系。据此与同样处理的丙酮酸标准液相比较，便可算出或通过标准曲线查出血清中ALT