[仪器分析十二章分子发光.pptVIP

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2017-01-08 发布于北京
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[仪器分析十二章分子发光

5.荧光定量分析原理 (1)荧光定量关系式荧光强度 If正比于吸收的光量Ia和荧光量子效率? ： If ＝ ? Ia 由比耳定律： Ia ＝I0-It ＝ I0 (1-10-? b c ) If ＝ ? I0(1-10-? b c ) ＝ ? I0(1-e-2.3? bc ) 浓度很低时，将括号项近似处理后：（参看P.349） If ＝ 2.3 ? I0 ? b c ＝ Kc 荧光定量关系式 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. （2）定量方法标准曲线法：配制一系列标准浓度试样测定荧光强度，绘制标准曲线，再在相同条件下测量未知试样的荧光强度，在标准曲线上求出浓度。比较法：在线性范围内，测定标样和试样的荧光强度，比较。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. （3）影响荧光强度的因素 1）溶剂的影响除一般溶剂效应外，溶剂的极性、氢键、配位键的形成都将使化合物的荧光发生变化。 2）温度的影响荧光强度对温度变化敏感，温度增加，外转换去活的几率增加。 3）溶液pH的影响对酸碱化合物，溶液pH的影响较大，需要严格控制。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 4）各种散射光的影响 5）激发光照射的影响　　由溶剂产生的散射光（瑞利或拉曼散射）有可能产生较严重的干扰。　　消除方法：通过选择合适的激发波长来消除。　　有些荧光物质会发生光分解，使荧光强度降低。　　消除方法：采用低强度激发光、缩短测定时间。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 6）荧光猝灭　　荧光物质与溶剂分子或其它溶质分子相互作用，引起荧光强度下降或消失的现象称为荧光猝灭。　碰撞猝灭：　M＊+ Q(熄灭剂) → M + Q + 热（熄灭）　　或　M＊+ Q(熄灭剂) → M + Q＊氧的熄灭作用：溶液中溶解氧分子可加速系间窜跃。　自熄灭和自吸收　：荧光物质浓度大时产生。自熄灭——激发态之间碰撞引起能量损失形成。自吸收——当荧光光谱与吸收光谱重叠时，荧光被溶液中基态分子吸收。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .N