蛙心灌流报告蛙心灌流报告.docVIP

蛙类离体心脏灌流 院系：生命科学学院 实验人：张优 邓晓娟（本次实验报告由张优执笔） 实验目的 1、学习斯氏离体蛙心灌流法。 2、了解心肌的生理特性。 3、观察Na+,K+,Ca2+及肾上腺素,乙酰胆碱对离体心脏活动的影响。 实验原理 两栖类动物无冠状循环 两栖类动物无冠状循环，心肌直接从流经心腔的血流中获取营养。即心室肌直接从心室腔中获得营养。故用任氏液置换心室中的血液后，心室插管中的灌流液便成为心室肌的细胞外液。 心肌对细胞外离子浓度和体液因数敏感 钾、钙和钠离子对心肌特性的影响 1.血钾 浓度过高时（高于7.9mmol/L），心脏兴奋性、自律性、传导性及收缩性都下降，表现为收缩力减弱、心动过缓和传导阻滞，严重时心脏可停搏于舒张期。 2.血钙 浓度升高时，心脏收缩力增强，过高可使心室停搏于收缩期。血钙浓度降低，心肌收缩力减弱。 3.钠离子 浓度的轻微变化，对心肌影响不明显，只有发生明显变化时，才会影响心肌的生理特性。肾上腺素可使心率加快、传导加快及心肌收缩力增强，乙酰胆碱则与肾上腺素的作用相反。 实验材料 青蛙、 常用手术器械、蜡盘、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、滴管、小烧杯、纱布、棉线、任氏液、蛙心套管、套管夹、0．65％NaCl、5％NaCI、2％CaCl2、1％KCl、1：5 000肾上腺素、1：10 000乙酰肌碱、300U／mL肝素。 实验步骤 蛙心的解剖 1.毁脑毁脊髓 2.打开胸腔 3.剪开心包膜、暴露心脏 （二）斯氏蛙心插管法 1.结扎 左主动脉下方穿一线，于动脉圆锥处结扎。左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备用。 插管 左主动脉结扎处下方用眼科剪剪一小切口，将盛有任氏液＋少量肝素的蛙心插管由此口插入主动脉，至动脉圆锥时约“向后向下向前”试插，当心室收缩时容易经主动脉瓣插入心室腔内。 心脏离体 稳定套管后，轻轻提起备用线，将左、右主动脉连同插入的套管用双结扎紧，将结线固定在套管的小玻璃钩上，然后剪断结扎线上方的血管。轻轻提起套管和心脏，于静脉窦下方剪断有牵连的组织，使心脏离体。用任氏液反复冲洗心室内余血，使套管内灌流液不再有残留血液。保持套管内液面高度一致2 cm。 支架固定 将插好离体心脏的套管固定在支架上，用蛙心夹夹住少许心尖部肌肉。再将蛙心夹上的系线绕过一个滑轮与张力传感器相连。张力传感器与计算机采集系统相连。如右图。 实验观察操作 （1）记录正常心搏曲线。 （2）将蛙心插管0.65％NaCl溶液全部进行灌流，液面高度不变，并作好标记，观察用简单的生理盐水取代任氏液后心脏活动的变化。待心搏曲线出现明显变化时，立即吸去插管中的灌流液，同时作好冲洗标记，并用正常、干净的任氏液清洗2～3次，待心搏恢复正常或接近正常，并保持稳定。 （3）在插管内正常任氏液的基础上，加入2滴5%NaCl溶液，作好加药标记，观察心搏曲线的频率及振幅的变化。当曲线出现明显变化时，立即吸去插管中的灌流液，用干净任氏液清洗3次，待心搏恢复正常或接近正常，并保持稳定。 （4）向插管内加入半滴2%CaCl2溶液，观察并记录心搏曲线的变化。当出现明显变化时，立即更换任氏液（方法同上），清洗，待心搏恢复正常或接近正常，并保持稳定。 （5）向插管中加半滴1%KCl溶液，记录心搏曲线的变化。当心搏曲线变化时，立即同法更换灌流液，清洗，待心搏恢复正常或接近正常，并保持稳定。 （6）同法记录插管中加入半滴1∶5000肾上腺素溶液后心搏曲线的变化。 （7）同法记录插管中加入半滴1∶10000乙酰胆碱溶液后心搏曲线的变化。 实验结果及分析 1、正常博击曲线图 方式 速度（s/div） 灵敏度（g） 频率（Hz） 张力 2 3 10 滴加0.65%NaCl溶液图 方式 速度（s/div） 灵敏度（g） 频率（Hz） 张力 2 3 10 滴加0.65%NaCl溶液后，心跳减弱，这是由于用0.65%NaCl溶液灌注蛙心时，由于灌注液中缺乏Ca2+，以致心肌细胞动作电位2期内流Ca2+减少，细胞质Ca2+浓度减少，心肌的收缩活动也随之减弱。 滴加5%NaCl溶液 方式 速度（s/div） 灵敏度（g） 频率（Hz） 张力 5 3 10 　　由于细胞外液中钠浓度差梯度的变化一般对心肌活动影响不明显。因此上图的心率变化与滴加0.65%NaCl溶液里变化并不是很大，两个不同浓度的相同溶液作用机理是一样的。但如果实验中滴加溶液顺序不一样，若先滴加5%NaCl.再滴加0.65%NaCl溶液，所得的心搏变化就不如图3那样明显了，收缩力仅出现很微弱的变化。 4.滴加2%CaCl溶液