抗生素抗菌谱以及微生物的耐药性.docVIP

生物制药专题报告 姓名 专业 学号 实验一：抗生素抗菌谱及微生物耐药性 1、实验目的： 1.1学习抗生素抗菌谱的测定方法，了解常见抗生素的抗菌谱。 1.2学习微生物耐药性的测定方法，了解微生物对抗生素耐药性产生的原因及对策。 2.实验原理： 2.1抗生素抗菌谱的测定：抗生素—是一类由微生物或其它生物生命活动中合成的次级代谢产物或其人工衍生物，在低浓度时就能抑制或干扰它种生物（包括病原菌、病毒、癌细胞等）的生命活动，可作为优良的化学治疗剂。各种抗生素有其不同的抑菌范围，即抗菌谱。如青霉素、红霉素：抗G+；链霉素、新霉素：抗G-；庆大霉素、万古霉素、头孢菌素：兼抗G+和G-；氯霉素、四环素、金霉素、土霉素：G+和G-以及支原体、衣原体和立克次氏体等 2.2微生物耐药性的测定：耐药性-即抗药性，指微生物、寄生虫或肿瘤细胞对于化学治疗药物作用的耐受性。耐药性一旦产生，药物的化疗作用就明显下降。 3.实验材料： 3.1抗生素抗菌谱的测定： 菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、脓绿杆菌、沙门氏菌四种 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基 供试抗生素：左氧氟沙星和Amp两种 设备与用具：恒温培养箱、接种环、培养皿 3.2微生物耐药性的测定： 菌种：大肠杆菌 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基 供试抗生素：庆大霉素、土霉素、氨苄青霉素、环丙沙星、头孢拉定、罗红霉素、盐酸左氧氟沙星。 设备与用具：恒温培养箱、镊子、圆滤纸片、培养箱 4.实验步骤： 4.1抗生素抗菌谱的测定： （在无菌操作台进行操作）将加入左氧氟沙星的的平板和加入Amp的平板大致划分为4等分，每一等分用记号笔表明相应的细菌名称。 用接种环分别在相应区域接种四种不同的细菌。 将划好线的细菌平板，置37oC倒置培养24-48h。 记录细菌的生长情况，根据其生长情况可以初步确定相应抗生素的抗菌谱。 4.2微生物耐药性的测定： 将金黄色葡萄球菌菌液和大肠杆菌菌液分别涂布在两个平板上，基本涂布均匀。 将平板划分为6等分，最中间的可作为第七份，每一等分都表明相应的抗生素名称，将分别浸有抗生素的小圆滤纸片贴在平板的每一等分中。 将贴好滤纸片的含菌平板置37oC倒置培养24-48h。 观察平板上各小圆纸片周围有无抑菌圈，根据其抑菌圈情况可初步确定各抗生素的耐药情况。 5.实验结果与讨论： 5．1抗生素抗菌谱测定的结果：加入左氧氟沙星的的平板上都没有长菌。 由于左氧氟沙星是广谱类抗生素，抗菌作用强，对多数肠杆菌科细菌均有抗菌作用尤其对需氧革兰氏阴性杆菌的抗菌活性高，因此在含有左氧氟沙星的平板上什么都没有长。 加入Amp的平板中，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌是没有长菌的，脓绿杆菌和沙门氏菌是长菌的。氨苄青霉素是广谱半合成青霉素，抗菌作用和青霉素相似，主要抑制肠球菌等等，因此在加入Amp的平板中脓绿杆菌和沙门氏菌长菌而大肠杆菌和金黄色葡萄球菌是没有长菌。如下图所示。 图1 加入左氧氟沙星的平板 注：菌种分别为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、脓绿杆菌、沙门氏菌 图2 加入Amp的平板 注：菌种1、2、3、4分别为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、脓绿杆菌、沙门氏菌 5.2微生物耐药性的测定结果： 5.2.1对于涂布金黄色葡萄球菌菌液的平板：左氧氟沙星和环丙沙星周围完全没有长菌，抑菌圈最明显；土霉素，庆大霉素也有抑菌圈，但稍小些；而头孢拉定、罗红霉素和氨苄青霉素周围都有长菌，没有抑菌圈。如果出现抑菌圈则说明该抗生素不耐药。在涂布金黄色葡萄球菌菌液的平板上，说明左氧氟沙星和环丙沙星，土霉素，庆大霉素都具有不耐药，而头孢拉定、罗红霉素和氨苄青霉素则相应的有耐药性。 5.2.2对于涂布大肠杆菌菌液的平板：只有罗红霉素没有抑菌圈，其他的周围都有抑菌圈。在涂布大肠杆菌菌液的平板上，说明了除了罗红霉素具有耐药性以外，其它6个均没有耐药性。 图3 涂布金黄色葡萄球菌菌液的平板 注：1-头孢拉定、2-左氧氟沙星、3-罗红霉素、4-氨苄青霉素、5-环丙沙星、6-庆大霉素、7-土霉素 图4涂布大肠杆菌菌液的平板 注：1-头孢拉定、2-左氧氟沙星、3-罗红霉素、4-氨苄青霉素、5-环丙沙星、6-庆大霉素、7-土霉素 6.思考与问答： 6.1什么叫抗生素？什么是耐药性？ 答：抗生素是指是一类由微生物或其它生物生命活动中合成的次级代谢产物或其人工衍生物，在低浓度时就能抑制或干扰它种生物的生命活动，可作为优良的化学治疗剂。耐药性是指即抗药性,指微生物、寄生虫或肿瘤细胞对于化学治疗药物作用的耐受性。 6.2微生物产生耐药性的原因有哪些？ 答：会产生一种使药物失去活性的酶；把药物作用的靶位加以修饰和改变；使药物不能透过细胞膜；通过主动