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染色体标本制备及核型分析 染色体核型分析 质量保障部 Faye 一、名词解释 二、染色体标本制备 三、染色体核型分析 实验耗材 前期处理 实验步骤 玻片标本质量评价 计数标准、合格指标 染色体核型排列 核型检测的可重复性 一、名词解释 核型 分裂相 一个体细胞中的全部染色体，按其大小、形态特征顺序排列所构成的图像。 小鼠：♂ 40，XY 、♀ 40，XX 人类：♂ 46，XY 、♀ 46，XX 细胞分裂过程中每个时期的细胞形态特征，包括细胞的总体形状和遗传物质的变化。 一、名词解释 数量变异 （性染色体丢失/增加、近端着丝粒染色体三体） （中期）分裂相 核型 结构变异 （缺失、重复、倒位、易位） 二、染色体标本制备 实验耗材 仪器设备： 超净工作台、恒温培养箱、恒温水浴箱、离心机、光学显微镜、刻度离心管、乳头吸管、棕色试剂瓶、载玻片、吹风机、玻片架、染色缸 主要试剂： 秋水仙素、低渗液、卡诺氏固定液、吉姆萨染液、胰酶、1N HCl、1N NaOH、MEF培养基、PBS 二、染色体标本制备 前期处理 样品要求：对数期生长，状态良好，紧密度高，折光性好，细胞量≥T25 / 60 mm平皿 差速贴壁法去除MEF（ KSR培养体系除外） 终止培养前1~2小时，加入秋水仙素（100ug/ml），最终浓度为0.1~0.2ug/ml。 二、染色体标本制备 实验步骤 二、染色体标本制备 细胞收获 制片 固定 预固定 低渗处理 实验步骤 二、染色体标本制备 细胞收获 制片 固定 预固定 低渗处理 实验步骤 二、染色体标本制备 细胞收获 制片 固定 预固定 低渗处理 加入37℃预热的低渗液（0.075 mol/L）5 ml，吹打至均匀，37℃水浴15-20 min。 实验步骤 配制： 0.075 mol/L KCl溶液 作用：低渗作用 因素：时间、温度、浓度 二、染色体标本制备 细胞收获 制片 固定 预固定 低渗处理 实验步骤 二、染色体标本制备 细胞收获 制片 固定 预固定 低渗处理 实验步骤 离心弃上清，将细胞沉淀震荡悬浮或气泡吹打法轻柔地重悬细胞。沿管壁缓慢加入固定液0.5-1.0 mL，边滴加边震荡均匀，静置5 min后离心弃上清。 配制：甲醇：冰乙酸= 3：1，现用现配。 作用：固定并维持染色体结构的完整性 防护：甲醇→毒性， 冰乙酸→刺激性和腐蚀性 二、染色体标本制备 细胞收获 制片 固定 预固定 低渗处理 实验步骤 二、染色体标本制备 细胞收获 制片 固定 预固定 低渗处理 实验步骤 二、染色体标本制备 细胞收获 制片 固定 预固定 低渗处理 实验内容 二、染色体标本制备 细胞收获 制片 固定 预固定 低渗处理 实验步骤 用滴管吸取细胞悬液，高空滴在冰冻玻片上，立即在酒精灯的火焰下过火几次，置80℃烤箱中烤片2h。 要求：洁净、冰冻 处理：逐片清洗（洗洁精→超声波→自来水→纯水），95%乙醇浸泡24 h，纯水逐片刷洗，放置于装有纯水的器皿中，4 ℃保存。 二、染色体标本制备 细胞收获 制片 固定 预固定 低渗处理 实验步骤 二、染色体标本制备 细胞收获 制片 固定 预固定 低渗处理 实验步骤 预热胰蛋白酶消化25-30s，Giemsa染色10min。 清水冲洗染液，用吹风机吹干。 要求：0.25%，pH6.8～7.2 作用：去除染色体上的蛋白质，便于染色。 配制： Giemsa原液：磷酸缓冲液（pH 7.4）= 1：9，现用现配。 三、染色体核型分析 玻片标本质量评价 玻片颜色 蓝紫色 玫红色 着色浅 √ 解决方案 配制新的染液； 适当提高胰酶消化玻片的时间。 三、染色体核型分析 玻片标本质量评价 细胞密度 过密 适中 过稀 √ 解决方案 制备玻片时，对每一个样品都先进行试片，并在镜下观察细胞密度，从而调整悬液密度。 三、染色体核型分析 玻片标本质量评价 分裂相密度 足够 稀少 √ 解决方案 适当提高固定液中冰醋酸比例；制备较多的玻片 三、染色体核型分析 玻片标本质量评价 分裂相形态-紧密度 过密 适中 过散 解决方案 过密：适当提高固定液中冰醋酸比例； 过散：适当降低固定液中冰醋酸比例。 √ 三、染色体核型分析 玻片标本质量评价 分裂相形态 过密 适中 过散 解决方案