2006NobelPrizeinPhysiologyorMedicine..docVIP

2006 Nobel Prize in Physiology or Medicine RNA interference -gene silencing by double-stranded RNA 　　系級：　醫學系一年級 　　組長：　李道寒(b9602100) 　　組員：　陳弘晉(b9602052) 黃漢群(b9602070) 葉栢睿(b9602075) 趙怡婷(b9602080) 謝孟婷(b9602092) 一、前言 　　在製造蛋白質表現基因的過程中,是先將乘載著基因的DNA轉錄成RNA，再將RNA轉譯成所需的蛋白質。而RNA在這之間就像是一個橋樑。後來部分的科學家發現雙股RNA對基因的表現有抑制的現象，遂展開了對雙股RNA的研究工作。 　　這次的報告主要就是在說明2006年諾貝爾生理暨醫學獎得獎的內容RNAi。 二、RNAi的發現歷程 　最初發現RNAi現象的是Rich Jorgensen和他的同事。他們在研究chalcone sythase (CHS)，用病毒感染的方式植入一段帶有CHS控制基因的片段到牽牛花中，原本預期會因過表現而使紫色更深，但結果顏色卻淡化出現白紫相間甚至白色的花。拿此結果去做protein analysis發現原先花中帶有此基因的50%未被轉譯，代表此花中控制CHS的基因和外來的控制CHS的基因一起被抑制了。當時稱作co-suppression。 圖為他們實驗的結果。縱行是植入不同位置的片段基因，結果影響花色改變的部位不同；橫列是打入的濃度不同，因此顏色白化的程度就不同。 1992年相同顏色白化的現象在Neurospora crassa(一種紅色的麵包黴)上發現，當時稱為quelling。1995年sense及antisense股分別注入線蟲體內，發現都會產生gene silencing的現象。但是後來1998年Fire和Mello兩人redo的結果發現只有雙股RNA才能產生gene silencing，並推測之前的錯誤應是由於受到嗜菌體polymerase污染。他們也突出了RNAi作用的大概機制流程。 同年將他們的研究發表在Nature，後人也慢慢接受他們引入的新觀念並使用他們造的詞RNAi。不過其細部活動路徑的明朗化，例如RISC、siRNA、Dicer之類的發現是在2000年之後了。在2002年之後，RNAi開始應用在疾病、病毒的治療，前者如類風濕性關節炎，後者如HIV。 三、得獎實驗內容簡介 1998年Fire 和 Mello 線蟲實驗： 　　起初他們兩人為了測試RNA對線蟲抽搐的影響，在三隻線蟲各注入sense， anti-sense及double-strand的RNA，結果發現不管是sense還是anti-sense的RNA都沒辦法使線蟲明顯抽搐，反而是double-strand RNA會讓線蟲劇烈抽搐（圖A）。 圖A 　 　　這引起了他們的興趣，因而Melo教授又再做了一個實驗，將線蟲的胚胎細胞（深褐色)取出，再做一次實驗，結果也發現，無論是sense還是anti-sense RNA都只能讓它們褪色一點點而已，而double-strand RNA卻能使它的顏色完全消失（圖B），才確定的確是雙股RNA對生物體的作用非常大。 圖B 四、重要實驗詳述 將unc-22 gene注入C. elegans 前面提到的1988年科學家所做的實驗結果，是注入單股的sense RNA和antisenseRNA都會讓線蟲產生抽蓄的現象，這和預期的結果不符合。於是Fire 和Mello再進行一次實驗，首先將unc-22基因注入C. elegans，接著分別注入單股的sense RNA和antisenseRNA，實驗結果兩者都不會產生抽蓄，但是若將兩股RNA合成double-stranded RNA注入線蟲體內，則線蟲產生抽蓄現象。由於unc-22 基因的功用是負責肌絲蛋白的合成，而每個橫紋肌細胞中都有數千個肌絲蛋白，所以如果unc-22無法成功轉譯出肌絲蛋白，線蟲就會產生抽蓄現象。實驗結果代表只有double-stramded RNA才有干擾轉譯過程的效果，同時Fire 和Mello 也發現，之前科學家的錯誤實驗結果是因為培養基被double-stranded RNA所污染了。 這種RNA干擾的現象可從親代遺傳到子代，但是double-stranded RNA是存在於細胞質中，所以在遺傳過程中會逐漸被稀釋，最後還是有可能表現出unc-22基因。 此外，double-stranded RNA可以是 1. 注入的時候就是double-stranded的狀態 2. 在