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实验技术习题.
《分子生物学常用实验技术》课堂练习题 参考答案
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一、填空题。
在用SDS分离DNA时,要注意SDS浓度,0.1%和1%的SDS作用是不同的,前者 ,后者 。
SDS是一种提取DNA时常用的阴离子去污剂,它可以溶解膜蛋白和脂肪,使细胞膜和核膜破裂,使核小体和核糖体解聚,释放出 。它还可以使蛋白质变性沉淀,也能抑制 。
在分离DNA时,需要带手套操作,是因为 。
用酚-氯仿抽提DNA时,通常在氯仿或酚-氯仿中加入少许异戊醇,这是因为有机溶剂异戊醇可以 。另外,异戊醇有助于分相,使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白质相和下层有机溶剂相维持稳定。
在分离DNA时,要用金属离子螯合剂,如EDTA和柠檬酸等,其目的是: 。
在DNA分离过程中,造成DNA分子断裂的因素很多,主要有: 、 和 。
在分离DNA时,常用酸变性、碱变性、热变性和 来去除蛋白质。
用乙醇沉淀DNA的原理是: 。
用乙醇沉淀DNA时,通常在DNA溶液中加入单价阳离子,如氯化钠和乙酸钠,其目的是 。
通常可在3种温度下保存DNA:4~5℃、-20℃和-70℃,其中以 ℃为好。
浓缩DNA的方法通常有:包埋吸水法、蒸发法、膜过滤法和 。
碱裂解法和清亮裂解法是分离质粒的两种常用方法,二者的原理不同,前者是根据 ,后者是根据 。
在 技术中,DNA限制性酶切片段经凝胶电泳分离后,被转移到硝酸纤维素薄膜上,然后与放射性标记的DNA探针杂交。
SSC是氯化钠和柠檬酸钠组成的试剂,其中前者作用是: ,后者的作用是: 。
在southern杂交中,DNA转移的速度取决于 、 和 。
在重蒸酚中加入1%的8-羟基喹啉及少量β-巯基乙醇,不仅可以防止酚氧化,还可以抑制 活性以及 。
RNA分子经凝胶电泳后按大小不同分开,然后被转移到一张硝酸纤维素膜(尼龙膜)上,同一放射性DNA探针杂交的技术称 _ _。
根据Northern杂交结果可以说明 _ _。
cDNA技术是进行真核基因克隆的一种通用方法,因为它可以用 为模板。
将含有一个mRNA的DNA拷贝的克隆称为一个 ,源于同一批RNA制备物的克隆群则构建成了一个 。
受体细胞的感受态是 的生理状态。
感受态细胞是可以诱导的,诱导方法有 、 和 等。
人工感受态细胞的大肠杆菌在温度为 ℃时吸附DNA,在 ℃时摄入DNA。
为了提高重组DNA分子对E . coli的转化效率,通常可采取 和 。
环状质粒的转化效率很低,通常是线性双链DNA转化效率的 。
SalⅠ是识别6个核苷酸的酶,其识别切割的理论值是每 个碱基就有一个切点,但在哺乳动物中大约300Kb个碱基才有一个切点。
重组DNA技术常用的限制性内切核酸酶可识别某些特异碱基序列,具有 结构。
产生平末端的方法通常有: 、 和 。
在酶切反应管加完各种反应物后,要离心2秒,其目的是: 和 。
连接酶是一类用于核酸分子连接形成 的核酸合成酶,有DNA连接酶和RNA连接酶之分。
为了防止载体DNA自身环化,可用 脱去双链DNA的 。
用于克隆的DNA片段,在质量上要求:1)稳定性,保持其分子构型;2)低蛋白质含量;3)纯度要高,不含 ;4)不含可透析的小分子,如酒精等。
构建基因组文库时连接方法主要是
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