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《分子生物学常用实验技术》课堂练习题 参考答案 学号： 姓名： 一、填空题。 在用SDS分离DNA时，要注意SDS浓度，0.1%和1%的SDS作用是不同的，前者 ，后者 。 SDS是一种提取DNA时常用的阴离子去污剂，它可以溶解膜蛋白和脂肪，使细胞膜和核膜破裂，使核小体和核糖体解聚，释放出 。它还可以使蛋白质变性沉淀，也能抑制 。 在分离DNA时，需要带手套操作，是因为 。 用酚-氯仿抽提DNA时，通常在氯仿或酚-氯仿中加入少许异戊醇，这是因为有机溶剂异戊醇可以 。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白质相和下层有机溶剂相维持稳定。 在分离DNA时，要用金属离子螯合剂，如EDTA和柠檬酸等，其目的是： 。 在DNA分离过程中，造成DNA分子断裂的因素很多，主要有： 、 和 。 在分离DNA时，常用酸变性、碱变性、热变性和 来去除蛋白质。 用乙醇沉淀DNA的原理是： 。 用乙醇沉淀DNA时，通常在DNA溶液中加入单价阳离子，如氯化钠和乙酸钠，其目的是 。 通常可在3种温度下保存DNA：4～5℃、-20℃和-70℃，其中以 ℃为好。 浓缩DNA的方法通常有：包埋吸水法、蒸发法、膜过滤法和 。 碱裂解法和清亮裂解法是分离质粒的两种常用方法，二者的原理不同，前者是根据 ，后者是根据 。 在 技术中，DNA限制性酶切片段经凝胶电泳分离后，被转移到硝酸纤维素薄膜上，然后与放射性标记的DNA探针杂交。 SSC是氯化钠和柠檬酸钠组成的试剂，其中前者作用是： ，后者的作用是： 。 在southern杂交中，DNA转移的速度取决于 、 和 。 在重蒸酚中加入1%的8-羟基喹啉及少量β-巯基乙醇，不仅可以防止酚氧化，还可以抑制 活性以及 。 RNA分子经凝胶电泳后按大小不同分开，然后被转移到一张硝酸纤维素膜（尼龙膜）上，同一放射性DNA探针杂交的技术称 _ _。 根据Northern杂交结果可以说明 _ _。 cDNA技术是进行真核基因克隆的一种通用方法，因为它可以用 为模板。 将含有一个mRNA的DNA拷贝的克隆称为一个 ，源于同一批RNA制备物的克隆群则构建成了一个 。 受体细胞的感受态是 的生理状态。 感受态细胞是可以诱导的，诱导方法有 、 和 等。 人工感受态细胞的大肠杆菌在温度为 ℃时吸附DNA，在 ℃时摄入DNA。 为了提高重组DNA分子对E . coli的转化效率，通常可采取 和 。 环状质粒的转化效率很低，通常是线性双链DNA转化效率的 。 SalⅠ是识别6个核苷酸的酶，其识别切割的理论值是每 个碱基就有一个切点，但在哺乳动物中大约300Kb个碱基才有一个切点。 重组DNA技术常用的限制性内切核酸酶可识别某些特异碱基序列，具有 结构。 产生平末端的方法通常有： 、 和 。 在酶切反应管加完各种反应物后，要离心2秒，其目的是： 和 。 连接酶是一类用于核酸分子连接形成 的核酸合成酶，有DNA连接酶和RNA连接酶之分。 为了防止载体DNA自身环化，可用 脱去双链DNA的 。 用于克隆的DNA片段，在质量上要求：1）稳定性，保持其分子构型；2）低蛋白质含量；3）纯度要高，不含 ；4）不含可透析的小分子，如酒精等。 构建基因组文库时连接方法主要是