HE染色protocol..docVIP

常规HE染色 石蜡包埋的组织切片必须经过脱蜡水洗处理才能染色，让水溶性染料渗入组织中，含蜡的组织切片无法进行任何染色。所以，在染色前必须用二甲苯或替换剂进行彻底脱蜡，经过乙醇洗后，再用水洗。即石蜡组织切片→二甲苯→乙醇（无水乙醇，95%，80%）→水。人们通常把这个过程叫做切片脱蜡至水。脱蜡至水是染色前的必须完成的基本步骤。一般脱蜡至水的时间和步骤如下： HE染色脱蜡至水步骤 步骤顺序 试剂 时间 1 二甲苯Ⅰ脱蜡 5 min 2 二甲苯Ⅱ脱蜡 5 min 3 二甲苯Ⅲ脱蜡 5 min 4 无水乙醇浸洗 1 min 5 95%乙醇Ⅰ浸洗 1 min 6 95%乙醇Ⅱ浸洗 1 min 7 80%乙醇浸洗 1 min 8 自来水冲洗 3-5 min 冰冻切片和细胞涂片样品的染色不需要经过脱蜡至水步骤，水洗后直接用苏木精和伊红染色。 染色是利用染料的不同作用，使组织与染料以不同方式进行结合。常规染色是苏木精和伊红染色（H.E）。特殊染色（special stains）和组织化学（免役组织化学）染色是根据诊断的需要对组织中的某些成分进行非常规的染色。 HE染色用的苏木精是一种树木苏木的一种氧化产品，因为这种树非常罕见，多数氧化苏木精是合成品。苏木精必须氧化成熟后才能使用。苏木精染液需要预先配制，放置几个月自然氧化成熟。或购买成熟过的商品苏木精，也可在苏木精液中加一些成熟剂。 苏木精本身对组织没有染色作用，需要“媒染剂”与组织连接，媒染剂是铁，铝，钨等由这类正离子金属提供。矾也是苏木精常用的媒染剂，如Harris苏木精的配制以硫酸铝钾（钾明矾）或铵明矾作为媒染剂。不同媒染剂配制的苏木精染色强度不同。苏木精作为一种基础染料对细胞核的核酸具有一定的亲和力。 苏木精不是“退行性”就是“进行性”染色，退行性染色是把切片在染液内留一段时间，然后从染液里出来用盐酸乙醇分化，去除过染的一部分。这种方法最适合大批量的染色。进行性染色切片在染液中染到自己想要得染色强度。如冰冻染色。冰冻染色比较简单，但染色质量不如成批处理的好。 伊红是一种酸性染料，和细胞的胞浆成分具有亲合力。有各种合成的伊红可共使用，它们的颜色各异，但作用都一样。在实验室中伊红比苏木精更稳定，伊红很少发生染色问题。唯一可以见到的问题是过染（overstaining），尤其是脱钙组织。 苏木精液配制 Harris苏木精液 苏木精 1g 无水酒精 10ml 硫酸铝钾或硫酸铝铵 20g 蒸馏水 200ml 先将苏木精溶于酒精，再将矾放进蒸馏水中，把苏木精液与矾液混合后，电炉加热溶解，待到煮沸后离开电炉，稍候片刻慢慢加入氧化汞0.5g。然后使液体迅速冷却，过滤后使用，使用前每100ml苏木精加入 冰醋酸 4ml 或改良明矾苏木精液 A液 苏木精 2g 95或100%乙醇 20ml 加热溶解。 B液 硫酸铝钾 16g 加热溶解后加入 蒸馏水 300ml 冷却后加入A液，然后加入 碘酸钠（准确称量） 200mg 搅拌三次，每次5分钟，30分钟后加 冰醋酸 10ml 即可使用。新配制的苏木精染色时间2分钟。 注意事项： 切片脱蜡至水后先用蒸馏水洗再入苏木精染色。 使用一周后苏木精会变蓝一些，这时可往液苏木精液中加2-10ml冰醋酸，过滤后使用。 Mayer苏木精明矾液 10%苏木精乙醇掖 10ml 碘化钠 0.2g 钾明矾或铵矾 50g 水合氯醛 50g 枸橼酸 1g 蒸馏水 1000ml 用蒸馏水溶解固体然后加入苏木精液。 伊红水溶液配制 伊红水溶液 伊红Y 0.5g 蒸馏水 100ml 先用少量蒸馏水溶解伊红，再用玻璃棒搅拌溶解，完全溶解后加入剩余的蒸馏水。 苏木精染色后分化需要的液体 盐酸乙醇液配制 盐酸乙醇液 75%乙醇 0100ml 浓盐酸 0.5ml 苏木精染色后蓝化需要的液体 目的（PURPOSE） To be used for bluing the hematoxylin stain, follows the decoloration, acid rinse, in regressive staining.. 蓝化液（BLUING SOLUTIONS） 1 Scott’s TapWater/Bluing 硫酸镁（MgSO4） 30g 碳酸氢钠 2g 自来水 3000ml 充分混合，标记 液体日期。推荐用于Gill’s Ⅲ苏木精蓝化。 2 0.05%碳酸锂 碳酸锂 0.5g 蒸馏水 1000ml 充分混合，标记 液体日期。 3 氨水 氢氧化铵 5ml 蒸馏水 1000ml