探讨姜黄素对单侧输尿管梗阻后肾间质纤维化的调节.docVIP

探讨姜黄素对单侧输尿管梗阻后肾间质纤维化的调节摘要： 目的： 研究姜黄素在单侧输尿管梗阻(UUO) 大鼠模型中能否减少肾间质中转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）和结缔组织生长因子（connective tissue growth factor，CTGF）的表达。 方法: 将30只大鼠随机分为3组，每组10只：假手术组、模型组、姜黄素组。模型组和姜黄素组行右侧输尿管接扎术，假手术组只游离不接扎。术后第14天处死各组中的大鼠，检测血液尿素氮（BUN）、血清肌酸酐（Scr）。用免疫组织化学方法测定TGF-β1、CTGF的表达情况，同时采用Masson染色，观察肾脏病理情况。结果: 姜黄素降低了BUN、Scr的含量，同时姜黄素显著减少了大鼠肾间质TGF-β1、CTGF的表达，并有效改善了肾脏的病理学损伤。 结论: 姜黄素可以减少输尿管梗阻后TGF-β1、CTGF的表达，从而改善UUO所致的肾脏损伤，提示姜黄素可能有延缓慢性肾脏疾病纤维化进程的潜能。 关键词： 输尿管梗阻； 纤维化； 姜黄素； 免疫组织化学； 大鼠，Spragua-Dawley； 肾间质 　　肾间质纤维化几乎是所有慢性肾脏疾病进行性发展的共同最终通路，延缓肾间质纤维化的发展，可降低终末期肾病(ESRD)的发生率［1］。姜黄素是姜黄中提取的一种植物多酚，也是姜黄发挥药理作用最重要的活性成分。近年来的研究不仅证明了姜黄的传统作用，而且还揭示出一些新的药理作用，如抗炎、抗氧化、清除氧自由基、抗人类免疫缺陷病毒、保护肝脏和肾脏、抗纤维化以及防癌抗癌等作用，而且无明显的毒副作用［2］。XX年5~8月研究了姜黄素抑制肾间质纤维化的作用机制，其中重在研究姜黄素对在单侧输尿管梗阻（UUO）模型大鼠中肾间质中转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）、结缔组织生长因子（connective tissue growth factor，CTGF）的影响，希望在临床上研制出有效药物。 1 材料与方法 1.1 材料 雄性、无特定病原体动物级（specific pathogen free, SPF）、Sprague-Dawley大鼠[同济医学院动物中心提供，生产许可证：SCXK（鄂）XX-0028]30只，7 w龄，体重(180.2±8.35)g。动物房饲养环境为每笼6只，每24 h换1次垫料，喂以正常饮食，自由进水，温度为（24±2）℃，相对湿度为（45±3）%。姜黄素纯度为＞95%（美国Sigma公司）；兔抗大鼠TGF-β1、CTGF 多克隆抗体及SP免疫试剂盒（北京中杉金桥生物技术有限公司）。 1.2 方法 1.2.1 造模 适应性饲养1周后，按照完全随机设计方法，以体重由轻到重的顺序编号用随机排列表法分为假手术组、模型组、姜黄素组各10只。假手术组和模型组每天给予蒸馏水2 ml灌胃，姜黄素组将姜黄素粉末（200 mg·kg-1·d-1）混悬于2 ml蒸馏水中灌胃，术前1 d开始给药。造模方法：模型组和姜黄素组行右侧输尿管结扎术，质量浓度为20 g/L戊巴比妥钠(50 mg/kg)腹腔注射麻醉后，行正中竖切口打开腹腔，分离右侧输尿管并行双结扎，假手术组只分离但不结扎。于术后第14天处死所有大鼠，处死前下腔静脉取血3 ml做血生物化学检验并行肾原位灌流去除血细胞。取右侧肾脏，纵切为两部分，一部分用体积分数为4%的多聚甲醛溶液浸泡24 h做病理及免疫组织化学检测，另一部分速冻于-70 ℃冰箱。 1.2.2 BUN、Scr检测 采用自动生化分析仪(Beckman CX3 Delta)进行BUN、Scr的检测。 1.2.3 免疫组织化学检查 SP法检测肾组织中的TGF-β1、CTGF表达，按SP试剂盒说明书进行。每张切片不含肾小球的肾小管间质区域，随机选取8个高倍镜视野（400倍），用免疫组织化学分析软件系统HMIAS-2000高清晰度彩色医学图文分析系统（同济医学院清屏影像公司）对所选视野内的棕黄色阳性信号进行图像分析，计算各组大鼠肾组织TGF-β1、CTGF的平均阳性表达率，即棕黄色阳性信号占整个视野的百分比。 1.2.4 肾组织病理检查 右侧肾组织行Masson染色，光镜观察肾间质纤维化情况。间质纤维化定量分析也借助HMIAS-2000高清晰度彩色医学图文分析系统，取Masson染色切片，每张切片观察8个不含肾小球，互不重叠的间质高倍镜视野（400倍），计算每张切片肾间质绿染面积占整个视野的百分比。 1.3 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件处理数据，计量数据采用(x±s)表示，组间比较用单因素方差分析和两两比较用q检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。 2 结果 2.1