实验三紫外-可见分光光度计的使用..docVIP

实验二 紫外-可见分光光度计1、学习使用紫外-可见分光光度计的使用。 2、掌握紫外-可见分光光度计的基本构造。 3、练习使用紫外-可见分光光度计对药物成分的鉴定。 1、紫外-可见分光光度计的构造。 2、紫外-可见分光光度计的使用。 教学难点： 1、紫外-可见分光光度计的构造。 2、紫外-可见分光光度计的使用。 教学方法：。 教学时数：4学时。 100-400 nm(纳米)，其中100-200 nm 为远紫外区，200-400 nm为近紫外区，一般的紫外光谱是指近紫外区，可见区400-800 nm。 可以跃迁的电子有：s，p和n电子。 跃迁的类型有：s ?s*，n ? s*，p ? p *，n? p *。 一般的紫外光谱是指近紫外区( 200-400 nm)，只能观察 p ? p *和 n? p *跃迁。也就是说紫外光谱只适用于分析分子中具有不饱和结构的化合物。 三、紫外光谱的表示法 1、紫外吸收带的强度 吸收强度标志着相应电子能级跃迁的几率，遵从Lamber-Beer定律： A = lg (I0 / I) = ?cl A：吸光度；e：消光系数； c：溶液的摩尔浓度，l：样品池长度 I0、I分别为入射光、透射光的强度 2、紫外光谱的表示法 UV图由横坐标、纵坐标和吸收曲线组成。 横坐标表示吸收光的波长，用nm为单位。 纵坐标表示吸收光的吸收强度，可以用A（吸光度）、T（透射比或透光率或透过率）、1-T（吸收率）、k（吸收系数）中的任何一个来表示。 T = I / I0 吸收曲线表示化合物的紫外吸收情况。曲线最大吸收峰的横坐标为该吸收峰的位置，纵坐标为它的吸收强度。 四、紫外-可见分光光度计的组成 1、组成 测量紫外光、可见分光光区吸光度的仪器目前仍以色散型的紫外-可见分光光度计为主。组成：光源、单色器、样品室、检测器、放大控制系统和显示系统等六个部分组成。 2、分类 （1）根据工作波段不同分类： A、真空紫外分光光度计（0.1 nm ~ 200 nm） B、可见分光光度计（350 nm ~ 700 nm） C、紫外-可见光光度计（185 nm ~ 900 nm） D、紫外-可见-近红外分光光度计（185 nm ~ 2500 nm） （2）根据光度学和记录系统不同分类 A、单光束手动式分光光度计 B、双光束自动记录式分光光度计 （3）根据同时提供的波长数不同分类 A、单波长分光光度计 B、双波长分光光度计 （4）根据扫描速度不同分类：动力学分光光度计 （5）根据是否分光分类 A、傅里叶变换紫外-可见光谱仪 B、色散型紫外-可见分光光度计 3、单光束分光光度计 单光束分光光度计只有单色器色散后的一束单色光，它是通过改变参比池和样品池的位置进行参比溶液和样品溶液的交替测量待测定样品溶液的吸光度。目前国内普遍应用的721型和751型属于此类，常用于定量分析。 4、双光束分光光度计 双光束分光光度计是将单色器色散后的单色光分成两束，一束通过参比池，一束通过样品池，一次测量即可得到样品溶液的吸光度。双光束分光光度计的特点是便于进行自动记录。 五、紫外-可见分光光度计的应用 1、推断官能团 如果一个化合物在紫外区有强的吸收，表明它可能存在共轭体系，吸收波长越长，共轭体系越大。 2、判断异构体 不同的异构体可能具有不同的紫外光谱，以此来判断属哪个异构体。 3、推断分子结构（骨架） （可结合Woodward规则的计算结果）。 4、分子量的测定 5、定量分析的应用 朗伯-比尔定律。 6、医药研究 抗癌药物对 DNA 变性影响的研究、人血清与癌细胞关系的研究。 六、实验部分（醋酸地塞米松含量的测定） （一）样品溶液的配制 1、取本品10片，精密称定，研细，再精密称取0.4g（约醋酸地塞米松7.5mg）,置50ml量瓶中 ，加乙醇35ml，超声溶解20分钟，放冷至室温； 2、加乙醇稀释至刻度 ，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 ml，置另一50ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，待用。 （二）样品的测定 1、依次打开电脑电源，分光光度计电源，在桌面上双击UV-Probe图表，输入密码； 2、等待仪器自检查，所有自检项目完成通过后，点击“确定”，再点击“基线”，进行基线校正； 3、将样品池和参比池均放上空白，点击“自动调零”。 4、将样品池换上样品，选择“编辑”中的“方法”，建立数据采集的方法； 5、然后再在200nm-400nm范围内扫描，确定最大吸收波长，保存数据； 6、再在最大吸收波长范围附近确定吸收波长范围，扫描测定其吸光度，保存数据； 7、打印图表，关闭仪器电源。 8、按吸收系数法计算本品的含量，计算公式如下 式（2）中： A为样品吸光度； W为平均片重（g/片