(伤寒Vi多糖疫苗.docVIP

伤寒Vi多糖疫苗 4. 内容： 4.1 产品名称及剂型 4.1.1 产品名称：伤寒Vi多糖疫苗 4.1.2 产品剂型：液体剂型剂型 4.2 产品概述：本品系用伤寒沙门菌培养液纯化的Vi多糖，经用PBS稀释制成，不含防腐剂。用于预防伤寒。 4.3 生产工艺流程图： 菌种（Ty2株CMCC50098） ↓ 传代（1代、2代） ↓ 小罐液体培养 ↓ 大罐液体培养 ↓ 杀菌、去菌体、收集多糖 ↓ 纯 化 ↓ 除菌过滤 ↓ 原液检定 ↓ 稀 释 ↓ 半成品检定 ↓ 分 装 ↓ 成品检定 ↓ 包 装 ↓ 成 品 4.4 生产、分包装和检定操作过程及工艺条件： 4.4.1 菌种 生产用菌种应符合《中华人民共和国药典》2010年版三部中“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。 4.4.1.1 菌种名称 生产用菌种为伤寒沙门菌Ty2株CMCC50098。 4.4.1.2 工作种子批的建立 工作种子批菌种来源于主种子库菌种。主种子库菌种经开启，传代扩增后冻干，冻干菌种经检定合格后为工作种子批。 4.4.1.2.1 主种子库菌种传代 主代冻干菌种启开后传一代于肉汤琼脂培养基，35～37℃培养16～20小时；传二代于肉汤琼脂培养基，35～37℃培养16～20小时。 4.4.1.2.2 工作种子批菌种的冻干制备 生长良好的二代菌种，混悬于脱脂牛奶保护剂中冻干。 4.4.1.2.3 工作种子批菌种的检定 4.4.1.2.3.1 培养特性及染色镜检 菌种接种于pH7.2～7.4的肉汤琼脂培养基35～37℃培养16～20小时，应为无色半透明、边缘整齐、表面光滑湿润的圆形菌落。染色镜检应为革兰阴性杆菌。 4.4.1.2.3.2 生化特性 接种葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、乳糖、蔗糖于35～37℃培养5～7日，发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇（产酸不产气）；不发酵乳糖、蔗糖（现行版《中华人民共和国药典》三部中附录ⅩⅣ）；氧化酶试验阴性。 4.4.1.2.3.3 血清学特性 （1）玻片凝集试验 将在35～37℃培养16～20小时的活培养物与伤寒Vi及O－9、H－d参考血清做玻片凝集试验，与Vi及H－d参考血清有强凝集反应（+++以上），与O－9参考血清不产生凝集或仅有较弱凝集反应。 （2）定量凝集试验 将在35～37℃培养16～20小时的活培养物，用PBS制成6.0×108/ml的菌悬液，加入终浓度为0.5%甲醛溶液，杀菌后的菌液，与伤寒Vi参考血清作定量凝集试验；另取经100℃30分钟加热杀菌的菌液，与伤寒O参考血清作定量凝集试验。充分摇匀后，放37℃过夜，以肉眼观察结果，出现（+）凝集之血清最高稀释度为凝集反应效价。凝集效价应不低于血清原效价之半。 4.4.1.2.4 种子批的保存 冻干后的主种子库菌种和工作种子库菌种保存于2～8℃。 4.4.2 原液 4.4.2.1 生产用种子 工作种子批菌种启开后传一代于肉汤琼脂培养基，35～37℃培养16～20小时；传二代于肉汤琼脂培养基，35～37℃培养16～20小时；传三代于改良半综合培养基，培养3～5小时，浓度达30～50亿/ml时用于大罐培养。 4.4.2.2 生产用培养基 采用改良半综合培养基，不含有与十六烷基三甲基溴化铵能形成沉淀的成份，见3.1。 4.4.2.3 培养 采用培养罐液体通气搅拌培养。温度35～37℃、通气量50～200L/min、pH6.8～7.4、培养6～8小时。在培养过程中及杀菌前取样进行菌液浓度测定及纯菌试验，涂片做革兰染色镜检，如发现污染杂菌则予以废弃。 4.4.2.4 收获及杀菌 当菌液浓度达到200～320亿/ml时中止培养，取样进行菌液浓度测定及纯菌检查。按培养量的1.2%加入甲醛溶液杀菌。 4.4.2.5 纯化 4.4.2.5.1 去核酸 4.4.2.5.1.1 去菌体 采用连续流离心法将已杀菌的培养液离心后收集上清液。 4.4.2.5.1.2 按终浓度0.06%～0.10%加入十六烷基三甲基溴化铵，充分混匀，存放4～24小时，形成沉淀。 4.4.2.5.1.3 采用连续流离心法收取沉淀物，并用0.5mol/L的氯化钠溶液溶解沉淀物，搅拌2小时，使多糖与十六烷基三甲基溴化铵解离。 4.4.2.5.1.4 加入95%乙醇至最终浓度为25%，2～8℃静置3～24小时，离心收集澄清的上清液。 4.4.2.5.2 沉淀多糖 于上述上清液中加入95%乙醇至最终浓度为80%，充分振摇使多糖沉淀，离心收集沉淀。沉淀物用无水乙醇及丙酮各洗2次，干燥后即为多糖粗制品。 多糖粗制品应保存在－20℃以下。 4.4.2.5.3 多糖纯化 将多糖粗制品溶解于1/10饱和乙酸钠溶液中，使其浓度达5～20mg/ml1:2容量用冷酚（100g结晶酚溶于