果蠅唾液腺染色体的制片与观察.docxVIP

果蝇唾液腺染色体的制片与观察实验目的学会果蝇幼虫的解剖技术学习唾腺染色体的染色制片方法观察唾腺染色体了解染色体横纹的特点实验原理黑腹果蝇幼虫期的唾腺细胞核非常大，唾腺染色体比其它细胞染色体大200多倍并且总是处于前期状态。这是由于染色体复制而分不开，纵向并列形成像电缆那样的巨大染色体，这样的染色体称为多线染色体，染色体上的染色粒排列在成横带在染色体的部位是一定的。从唾腺染色体的制片中可以看到五条长臂，好似从一共同的中心发射出来的，这个中心叫做染色中心。它是由于所有染色体在刚一接近其纺锤丝附着点时，即被相互吸引及紧密结合而成，这五条臂分别称为X、2L、2R（第二染色体的左右臂），3L及3R（第三染色体的左右臂），还有一小段用4来表示（第四染色体），每一条臂都含有二条紧密聚合的同源染色体，一条是母本的，来自卵核，一条是父本的，来自精子。在雄体的唾腺中，Y染色体大大的萎缩，X染色体则呈现不配对而成细长的一条。因为，每一条臂都含有二条紧密聚合的同源染色体，所以，当它们有相同的构造时，没有办法从两条紧密配对的双股的染色体复合体来彼此区分它们。但两条同源染色体之间有差别时，则很容易看出来。例如，当一条染色体缺失一个片段时，它的同源染色体，在这一段不能配对，就会拱起来，形成了一弧状结构，此外重复、倒位、易位等染色体畸变也可以看到。所以，果蝇唾腺染色体是研究染色体畸变的好材料，制备唾腺染色体标本，可以用果蝇3令幼虫，越肥越好，（温度在15℃左右，能使幼虫长得肥而大），果蝇的幼虫呈半透明状，有黑点的一端是头部，黑点是它的神经节，唾腺在神经节下面，呈两个半透明的棒状物，中间有一个细丝相连。实验材料及器材解剖镜、显微镜、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、培养皿、吸水纸、醋酸洋红、85%的生理盐水、1NHCl的盐酸，以及果蝇幼虫（3令的越肥越好的果蝇幼虫）。实验步骤从果蝇的培养瓶中的找出一只又大又肥的果蝇幼虫，用解剖针将其挑出放在载玻片上，滴两滴85%的生理盐水在果蝇的幼虫上。然后，将载玻片放在解剖镜上，将解剖镜调到最清晰的状态。用镊子夹住果蝇幼虫的前端的1/3处，然后用解剖针按住幼虫的头部轻轻的向前拉，将头部自身上拉开，腺体随之而出，腺体拉出后，剔除腺体旁边的脂肪。然后在拉出的腺体上滴上一滴1NHCl，浸泡2-3分钟。将用盐酸处理的腺体用蒸馏水冲洗2-3次，要小心的操作，以防腺体流失。吸去蒸馏水，加1-2滴醋酸洋红染色30分钟。用镊子加盖片、压片、镜检，当看到清晰的多线染色体后即可结束实验。如果看不到清晰的多线染色体则重复上述步骤，直至看到为止。结束实验，整理实验台。实验结果实验结论果蝇唾腺染色体为多线染色体，可以看到五条长臂和一个中心。实验注意事项实验选果蝇幼虫时一定要先选肥大的三令幼虫，因为这种幼虫的唾腺染色体比较容易观察。在拉唾腺的过程中必须分清楚唾腺和肠子，唾腺是人字型的。在拉唾腺的过程中一定要保证唾腺是在生理盐水的浸润中的，不能使唾腺变干。在分离出唾腺后最好用1NHCl解离2-3分钟。染色时，如果醋酸洋红中有较多的杂质，最好将杂质去除。染色好后，压片时必须垂直用力，压的时候不能使盖玻片移动，不能用铅笔等敲打盖玻片。观察时，一定要找出所有染色体中分离最好的那个。如果镜头中的载玻片上有许多的气泡，则可以再加一滴蒸馏水后，在用垂直的力压一压盖玻片。