第四细胞破碎.pptVIP

* 3 其它方法 自溶作用 冻结-融化法 干燥法 * 1）.自溶作用 自溶作用是酶解的另一种方法，利用生物体自身产生的酶来溶胞，而不需外加其他的酶。 在微生物代谢过程中，大多数都能产生一种能水解细胞壁上聚合物的酶，以便生长过程继续下去。 自溶作用：改变其生长环境（温度、ｐＨ、缓冲液），可以诱发产生过剩的这种酶或激发产生其它的自溶酶，以达到自溶目的。 缺点是：易引起所需蛋白质的变性，自溶后细胞悬浮液粘度增大，过滤速度下降。 * 2）冻结-融化法 将细胞放在低温下冷冻（约-15℃），然后在室温中融化，反复多次而达到破壁作用。 一方面能使细胞膜的疏水键结构破裂，从而增加细胞的亲水性能， 另一方面胞内水结晶，形成冰晶粒，引起细胞膨胀而破裂。 适用于细胞壁较脆弱的菌体，破碎率较低，需反复多次，此外，在冻融过程中可能引起某些蛋白质变性。 * 使细胞结合水分丧失，从而改变细胞的渗透性。当采用丙酮、丁醇或缓冲液等对干燥细胞进行处理时，胞内物质就容易被抽提出来。 气流干燥主要适用于酵母菌，一般在25-30℃的气流中吹干； 真空干燥多用于细菌。 冷冻干燥适用于不稳定的生化物质 3）干燥法 气流干燥 真空干燥 喷雾干燥 冷冻干燥 * * 选择破碎方法的依据： 细胞处理量； 细胞壁强度和结构(高聚物交联程度、种类和壁厚度)； 目标产物对破碎条件的敏感性； 破碎程度； 目标产物的选择性释放 * 选择性释放目标产物的一般原则 ⑴仅破坏或破碎存在目标产物的位置周围 当目标产物存在于细胞膜附近时，可采用较混和的方法，如酶溶法、渗透压冲击法和冻结－融化法等。当目标产物存在于细胞质内时，则需采用强烈的机械破碎法． 当目标产物处于与细胞膜或细胞壁结合的状态时，调节溶液PH值，离子强度或添加与目标产物具有亲和性的试剂如：螯合剂、表面活性剂等，使目标产物容易溶解释放。 (2)机械破碎法和化学法并用可使操作条件更加温和，在相同的目标产物释放率条件下，降低细胞的破碎程度。 * 思考题 常用的细胞破碎方法有哪些 在选择细胞破碎方法时需要考虑哪些因素？ 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * * μ0H20——标准化学电势 VH2o——水的偏摩尔体积 x1——细胞内所有溶质的总摩尔分数 若包内物为稀溶液，其偏摩尔体积等于纯水的摩尔体积。且x1很小时就有： * Pout-Pin=(RT/--VH2o)×ln(1-x1) =(RT/--VH2o) ×(-x1-…) =-RTc1+ … (4.3-3) 该式称为范特苛夫定律。 * 由该方程知细胞内压力必须小于细胞外压力，否者，水会流入细胞内，溶破细胞。我们可以采用等式4.2-3 估算出渗透压的大小。许多细胞内溶质浓度大约为0.1M NaCl 或0.2M溶质 。 由此可见渗透压必须很大，才导致了细胞的破碎。 * 通用性差； 时间长，效率低，一般胞内物质释放率不超过50%. 化学渗透法特点： 缺点 对产物释放有一定的选择性，可使一些较小分子量的溶质如多肽和小分子的酶蛋白透过，而核酸等大分子量的物质仍滞留在胞内； 细胞外形完整，碎片少，浆液粘度低，易于固液分离和进一步提取。 优点 * 2） 、 增溶法 第二种是利用表面活性剂的增溶法。最典型的是将体积为细胞体积两倍的某浓度的表面活性剂加入到细胞中。表面活性剂能将细胞壁破碎，制成的悬浮液可用离心分离除去细胞碎片，再用吸附柱或萃取剂分离制得产品。 * 细胞破碎常用的表面活性剂： 十二烷基硫酸钠（SDS，阴离子型）；。 非离子型如Triton X-100和吐温（Tween）等 对疏水性物质具有很强的亲和力，能结合并溶解磷脂，破坏内膜的磷脂双分子层，使某些胞内物质释放出来。 无论表面活性剂是阴离子、阳离子还是非离子型，都是两性的，既能和水作用也能和脂作用， 能与细胞壁上的脂蛋白结合，形成微泡，使膜的通透性增加或溶解 * 方法有效在于表面活性剂的化学性质，化学性质由图4.3-1所示的化学结构表示。结构中有一个亲水基团，通常是离子；一个疏水基团，通常是烃基。 表面活性剂通常是两性的，既能和水作用也能和脂作用。 * * 无论表面活性剂是阴离子、阳离子还是非离子型，都是两性的。SDS（十二烷基磺酸钠）是典型的阴离子表面活性剂。阴离子