第五章 病原微生物检验（参考）.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 水肿 * * * * * * * * * * * * * * * * * * （四）抵抗力　　 本菌对干燥的抵抗力特别强。粘附在尘埃上保持传染性8～10d，在干燥痰液中可存活6~8个月。 结核分支杆菌细胞壁中含有脂质，故对乙醇敏感，在70%乙醇中2min死亡。 对紫外线敏感，直接日光照射数小时可被杀死，可用于结核患者衣服、书籍等的消毒。 对常用消毒剂如石炭酸有较强的抵抗力。在4%NaOH（W/V）、3%HCl（W/V）或6%硫酸（W/V）中30min活力不受影响（因此可用此法进行有杂菌污染检样的预处理）。 对湿热敏感，经60℃、30min或80℃、5min死亡，巴氏消毒法可有效杀死本菌。 结核杆菌对1﹕13 000孔雀绿有抵抗力，加在培养基中可抑制杂菌生长。 二、生物学特性 三、检验 一）结核杆菌的常规检验 包括显微镜检查、细菌培养、动物试验、结核菌素试验等。 1. 显微镜检查 用检样制涂片，进行齐-尼氏抗酸染色和革兰氏染色，镜检。若被检材料是痰液或病灶，则检出革兰氏阳性的抗酸菌即可初步判断；而在牛乳、粪便、尿液中检出抗酸菌，必须再进一步鉴定。 三、检验 1. 显微镜检查 2. 细菌检查 （1）浓缩集菌：先集菌后检查，可提高检出率。脑脊液和胸、腹水无杂菌，可直接离心沉淀集菌。痰、支气管灌洗液、尿、粪等污染标本需经4% NaOH（痰和碱的比例为1:4,尿、支气管灌洗液和碱的比例为1:1）处理15min。尿标本先加5% 鞣酸、5% 乙酸各0.5ml于锥形量筒内静置，取沉淀物处理。处理后的材料再离心沉淀。取沉淀物作涂片染色镜检。若需进一步作培养或动物接种，应先用酸中和后再离心沉淀。 （2）固体培养法：取检样接种于固体培养基，分别置暗处和有光处，37℃培养4~8周后观察。根据生长快慢、菌落特性、色素产生情况及抗酸性强弱做出判断。如培养特性不典型，则须进一步鉴定。 （3）玻片培养法：检样经浓缩集菌后，涂布于灭菌小玻片上（不固定），置于有血液或血清的液体培养基中，37℃培养5~7d，取出染色检查。 三、检验 1. 显微镜检查 2. 细菌检查 3. 动物试验 分离细菌、测定毒力及分型时均可应用。常用豚鼠或地鼠。将检样注射于腹股沟皮下，3～4周后如发现局部淋巴结肿大或结核菌素试验阳性，即可剖检，观察淋巴结、肺、肝等脏器有无病变，并进行涂片染色镜检及细菌培养。动物接种的阳性率较染色镜检和细菌培养高，但耐异烟肼菌株毒力明显减弱，会影响实验结果。若6～8周仍不见发病，也应进行解剖检查。 三、检验 1. 显微镜检查 2. 细菌检查 3. 动物试验 4. 结核菌素试验 是牛结核病检疫时的主要方法，有皮内法、点眼法和皮下法3种。 最好将前两种方法同时并用，即同时进行皮内注射和点眼。 根据注射部位的热痛、肿胀等炎症反应，以及眼结膜反应、眼睑肿胀状态和眼分泌物的质与量进行判断。皮内接种和点眼任一方法呈阳性，即为结核菌素试验阳性。 禽类检疫时，用禽型结核菌素0.1mL注射于鸡的肉垂内，以48h出现肿胀和发红为阳性。 三、检验 二）其它检验方法 1. 荧光染色法 将检样涂片固定，然后用0.1%金胺石炭酸溶液染色，再用3%盐酸酒精脱色，最后以美兰饱和酒精溶液复染，于荧光显微镜下检查。若视野中有黄绿色明亮荧光的杆菌，即可作初步判断。 该法比常规抗酸染色法检出率高。 2. 生化试验 是鉴定结核杆菌的快速方法。 主要包括烟酸试验、硝酸盐还原试验、过氧化氢酶试验、尿素酶试验及β-葡萄糖苷酶试验等。 3. 血清学试验 血清学方法如间接血凝试验、ELISA、放射免疫测定、免疫荧光等，其中ELISA是目前检测结核病抗体的最好方法，对人的活动性结核检出率为55%~90%，对动物结核的检出率为50%~60%。 三、检验 二）其它检验方法 1. 荧光染色法 2. 生化试验 3. 血清学试验 4. PCR快速诊断　　一般涂片检查菌数需5?103～5?104/mL，培养需1?102/mL，少于此数时不易获得阳性结果，且培养需时较长。目前已将多聚酶链反应（PCR）扩增技术应用于结核分枝杆菌DNA鉴定，每毫升中只需含几个细菌即可获得阳性结果，且1~2d得出结果。 抗酸染色 菌落 Tuberculosis of Skin 菌落 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 三、检验 （一）检验程序 见《动物性食品检验学》第六章。 （二）细菌学检查 1.显微镜检查： 2.分离培养 3.鉴别试验 （三）其它检验方法 三、检验