【2017年整理】Alexa Fluor 染料.docVIP

栏 目 导 航无论你的实验需要标记的一抗，二抗或者其它扩增信号的方法，我们都有办法保证为你提供可用于每一种用途和仪器的最明亮的耦联物。 每一个免疫标记实验都会发现各种各样的问题。在多重技术应用中，你或许需要改变荧光染料或半抗原标记，以发现正确的匹配；你或许仅有极其微量的抗体来标记耦联；你或许需要显著的信号扩增来检测低丰度靶点的免疫标记……希望本篇抗体标记指南能够对您有所启迪。 采用Alexa Fluor 染料标记一抗尽管二级检测方法能够提供显著的信号扩增，然而直接标记的一抗通常可以产生较低的背景荧光和更少的非特异性结合。此外，当一抗被直接标记后，多个同种型（isotype）或来源于同一物种的一抗能容易地被应用在同一实验中；这样，在没有二级检测方法提供信号扩增步骤的情况下，使用可以获得的最亮的荧光标记的一抗变得比以往更加重要。Alexa Fluor染料是一系列的非常明亮并且光稳定的荧光基团，光谱可以跨越从蓝光到远红外光（图1，表1）。此外，这些染料已经被仔细的挑选和优化，以便具有极好的水溶解性，最小化的染料间的相互作用，并且容许较高程度的标记单克隆抗或多克隆抗体。除了具有可广泛选择的氨基反应Alexa Fluor 染料外，我们还提供三种类型的Alexa Fluor染料标记抗体试剂盒——Zenon IgG 抗体标记试剂盒，Alexa Fluor蛋白标记试剂盒, 和Alexa Fluor单克隆标记试剂盒（ HYPERLINK /custom/Invitrogen/5/page.html \l 02#02 详见表2）图1. Alexa Fluor系列染料的发射光谱表1. 可选择的Alexa Fluor染料Alexa Fluor 染料Abs/Em *光谱类似染料注 释Alexa Fluor 350346/442AMCAAlexa Fluor 350染料比AMCA 或AMCA-X更易溶于水并产生蛋白耦联，比来自于非磺酸盐类似物（nonsulfonated analog）的染料具有更强的荧光。此外，它的蓝移光谱能与绿色荧光基团的荧光光谱更好的分离。Alexa Fluor 405402/421Pacific Blue dye, Cascade Blue dyeAlexa Fluor 405染料是400–410 nm 激发光源的最佳荧光基团，包括蓝色二极管激光器的405 nm谱线。Alexa Fluor 488495/519Fluorescein,Oregon Green 488 dye, Rhodamine Green dye, Cy2 dyeAlexa Fluor 488蛋白耦联物在荧光强度和光稳定性方面都远超过荧光素，Cy2，和其他的绿色荧光。 与荧光素不同，Alexa Fluor 488染料在pH 4到10间对pH不敏感。Alexa Fluor 555555/565Tetramethylrhodamine, Cy3 dyeAlexa Fluor 555耦联物要胜过四甲基罗丹明（tetramethyl rhodamine TRITC和TAMRA）耦联物和Cy3.Alexa Fluor 568578/603Lissamine rhodamine B dye, Rhodamine Red dyeAlexa Fluor 568耦联物比Lissamine rhodamine B和Rhodamine Red-X耦联物具有更强的亮度并且能在Ar–Kr激光器的568 nm谱线的下被激发。Alexa Fluor 594590/617Texas Red dye,Cy3.5 dyeAlexa Fluor 594耦联物具有极强的光稳定性，比Texas Red耦联物荧光更强，并且可以在橙色He–Ne激光器的594 nm谱线下有效激发。Alexa Fluor 647650/668Cy5 dye,allophycocyanin (APC)Alexa Fluor 647的二抗耦联物的总体荧光要显著高于其他公司提供的Cy5耦联物的总的荧光（图3）。此外，不同于Cy5染料，当Alexa Fluor 647染料与多数蛋白、寡核苷酸、或核酸耦联，它在光吸收或荧光光谱方面几乎没有改变，因此在同等标记程度下会产生更强的荧光。Alexa Fluor 660663/690Cy5.5 dye, APCAlexa Fluor 660染料展示较好的与橙色荧光的光谱分离，包括Alexa Fluor 555染料和藻红蛋白（phycoerythrin PE）。这使得它成为在多色应用时的一个主要的选择。 Alexa Fluor 660染料在分别为He–Ne激光器的633 nm和氪离子激光器的647 nm谱线下被有效激发。Alexa Fluor 680679/702NAAlexa Fluor