《基因重组技术的基本工具》辩析.ppt

下列黏性末端属于同一种限制性内切酶切割的是（ ） A．①② B．①③ C．②④ D．③④ （规律技巧小结：找同一种限制性内切酶切割的黏性末端时，第一要看游离碱基能否互补配对，第二要看两条链上的切点是否相同。这是由酶的专一性决定的，当然限制酶也具有这个特点。） C 二、“分子缝合针”——DNA连接酶 1、种类： 2、作用： 3、区别： 二、“分子缝合针”——DNA连接酶 1、种类： 2、作用： 3、区别： ⑴ E·coli DNA连接酶 ⑵ T4 DNA连接酶 将双链DNA片断“缝合”起来,恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 可把互补的黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 E·coli DNA连接酶或T4DNA连接酶 　 T4 DNA连接酶 既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端，又可以“缝合”双链DNA片段的平末端但连接平末端之间之间的效率较低。 类型 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 功能 大肠杆菌 T4噬菌体 恢复 磷酸 二酯键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和平末端(效率较低) 相同点 差别 湖南省长沙市一中卫星远程学校 湖南省长沙市一中卫星远程学校 湖南省长沙市一中卫星远程学校 * 选修3 专题1------基因工程 1.本节重点----DNA重组技术所需的三种基 本工具的作用。 2.本节难点----基因工程中运载体需要具 备的条件。 1980年第一例转基因动物(转基因小鼠) 1973年转基因微生物 (转基因大肠杆菌) 1983年第一例转基因植物(转基因烟草) 转基因抗虫棉 基因工程的概念 基因工程-----通俗地说，就是按照人们的意愿，在生物体外，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰、改造，然后放到另一种生物的细胞里，从而创造出人类所需要的新的生物类型或基因产物，定向改造生物的遗传性状。 又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。 基因工程培育抗虫棉的简要过程？ 普通棉花(无抗虫特性) 具有抗虫基因的苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 导入 棉花细胞(含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性) 【复习回顾】 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？ “分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶 关键步骤一： 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 关键步骤二： 抗虫基因与棉花DNA“缝合” 关键步骤三： 抗虫基因进入棉花细胞 “分子缝合针”—— DNA连接酶 “分子运输车”—— 载体 一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 1、主要来源： 2、种类与命名： 3、作用特点： 4、限制酶识别序列 5、作用结果： 一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 1.主要来源： ⒉种类与命名： ⒊作用特点： 4.限制酶识别序列 5.作用结果： 识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 主要从原核生物中分离纯化 产生黏性末端或平末端 大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成，少数限制酶的识别序列由4、5或8个核苷酸组成 　 EcoRⅠ 黏性末端　　　　 黏性末端 当限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA两链分别切开时，产生的是-----黏性末端 SmaⅠ 平末端　　　平末端 1、限制酶能切割DNA分子，在原核生物内难道不会破化它本身的DNA，又对它有什么作用？ 疑 问 ? 1、DNA分子不具备该种限制酶的识别切割序列； 2、通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使了限制酶不能切开。 原核生物容易受到自然界外源DNA入侵，而生物在长期的进化过程中形成了一套比较完善的防御机制，限制酶就是这样一种防御工具。所以在原核生物中，限制酶主要起到切割外源DNA，使之失效，从而达到保护自己的目的。 2、 限制酶切断的部位是否含配对的碱基 之间的氢键？ 疑 问 ? 切割特定部位的两个 核苷酸之间的磷酸二酯键 A T G G C A T C T T C G A A （“磷酸—脱氧核糖” 之间的键） T A 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 限制酶 DNA解旋酶 区别 3、限制酶与DNA解旋酶的区别 切割特定的核苷酸序列的磷酸二酯键 将DNA两条链的氢键打开形成两条单链 限制酶 DNA水解酶 区别 4、限制酶与DNA水解酶的区别 切割特定的核苷酸序列的磷酸二酯键，形成片段的DNA. 切割磷酸二酯键，