2菌种选育辩析.ppt

三.菌种的衰退与复壮 菌种遗传特性的改变和菌种生理状况的改变 原因： 连续传代 保藏条件及保藏操作不当 菌种的自发突变和回复突变等自身突变 菌种的复壮 菌种的复壮方法 ： 纯种分离,淘汰已衰退的个体 在复壮前，仔细分析和判断菌种是衰退、污染还是仅仅是一般性的表型改变。 防止菌种退化的措施 提供良好的环境条件，减少传代次数 用优良的保藏方法 定期纯化菌种(菌种的复壮) 以下菌种保藏方法中，保藏时间最长的方法是（F），保藏时间最短的是（A），适用于产孢子或芽孢微生物的是（B），实验室短期保存常用的方法是（C） A 斜面冰箱保藏法 B 沙土管保藏法 C 菌丝速冻法 D 石蜡油封存法 E 真空冷冻干燥法 F 液氮超低温保藏法 （一） 斜面冰箱保藏法 4℃冰箱保存。保存期3-6个月。 （二） 沙土管保藏法 适合于产孢子或芽孢的微生物。 1、将沙与土洗净、烘干、过筛，（1-2）：1混匀，分装于小试管中，料高1厘米，121度间歇灭菌三次，烘干备用。沙80目，土80一100目。 2、将孢子制成悬液，接入沙土管。或将斜面孢子刮下直接与沙土混合，置干燥器中用真空泵抽干，冰箱内保存。 3、保存期1年左右。 （三） 菌丝速冻法 保藏温度为－20℃，为避免损伤致死，需甘油作保护剂。甘油最终浓度为25％。 操作：①、配制浓度为50％的甘油溶液，121℃灭菌后备用；②、制备菌悬液，一般浓度为108～1010个/mL；③、菌悬液和甘油溶液等体积混合均匀，置－20℃保藏。 保存期约为1年 （四） 石蜡油封存法 向菌种斜面上，倒入一层灭菌石蜡油，量高出斜面1cm，保存冰箱中。 适于不能利用石蜡油作碳源的微生物。 保存期约1年。 （五） 真空冷冻干燥保藏法 基本原理：在较低温度下(-18℃)，快速地将细胞冻结，并且保持细胞完整，然后在真空中使水分升华。在这样的环境中，微生物的生长和代谢暂时停止，不易发生变异。 菌种可保存5年左右。 基本操作：将微生物制成悬浮液，与保护剂混合，放在安瓿管内，用低温酒精或干冰迅速冻结，低温下用真空泵抽干，真空熔封。低温保藏。 保护剂：脱脂牛奶或血清等。牛奶可用离心或加热的方法脱脂。 保护剂的作用：在冷冻干燥的脱水过程中代替结合水而稳定细胞成分(细胞膜)的构型，防止细胞膜因为冻结而破坏。保护剂还可以起支持作用，使微生物疏松地固定在上面。 （六） 液氮超低温保藏法 是近几年才发展起来的，国外已较普遍采用，适用范围最广。尤其是一些不产孢子的菌丝体，用其他保藏方法不理想，可用液氮保藏法，其保存期最长。 （1）原理 液氮的温度可达-196℃，远远低于新陈代谢作用停止的温度(-130℃)，菌种代谢活动停止，化学作用消失。 （2）操作 a 安瓿管 需能承受大温差而不至于破裂，加棉塞后灭菌，烘干后备用。 b 菌种准备及分装 超低温冷冻过程需要保护剂。常用保护剂为10％甘油，制备好菌液后，加入安瓿管，装量0.2～1mL。 c 冻结 关键是把微生物从常温过渡到低温。这样在细胞接触低温前，使胞内水通过膜渗出，而不形成冰晶而伤害细胞。 美国ATCC先将菌液降到0℃，再1℃/min降低到－35℃，再放入液氮罐的气相中。 因液氮蒸发导致温度上升，冰晶状态发生变化而导致菌种死亡。所以要常常注意液氮残存量，定期补加。 d 重新培养 将安瓿管从冰箱中取出，室温迅速解冻，升温至0℃时即可打开安瓿管，移到适宜的斜面上培养。 * * 2 菌种选育 菌种的来源与筛选 诱变育种 抗噬菌体菌株的选育 杂交育种 原生质体融合技术 菌种保藏 第一节 菌种的来源与筛选 菌种来源选择标准： 1、天然材料（土壤等）：来源越广泛，含有目的菌的可能性越大，获得新菌种的可能性越高； 2、可寻找已适应苛刻环境的微生物类群。 例：从盐场分离出嗜盐链霉菌。 （一） 含微生物材料的选择 3、利用同一生态环境内的不同环境条件分离出更多种类的菌株。 例如：酸性土壤圈的放线菌类群与其紧接下层的中性圈的放线菌类群有很大不同。 4、自然环境的菌群可因人类的活动而改变。 例如：于土壤中加入去莠津会导致放线菌菌群数量的