(OD值结果分析.docVIP

---------------------------------------------------------- 吸光度,absorbance,是指光线通过溶液或某一物质前的入射光强度 与该光线通过溶液或物质后的透射光强度比值的对数 DNA 和RNA的纯度可以通过测定260nm，230nm和280nm的紫外吸收值来测定 一般来说OD260代表核酸的吸光度,OD280代表蛋白质的吸光度,OD230代表其他杂质(多糖等)的吸光度 A260/280 比值一度成为判断核酸纯度的唯一通用标准 DNA及RNA纯度的判断根据OD260/OD280的比值判断 DNA的A260/A280应在1.8-2.0之间， DNA 260/2801.8说明有蛋白质污染，2.0说明RNA污染。 样品中如果含有蛋白质及苯酚，A260/A280比值会明显下降。 RNAOD260/OD280的比值应达到2.0，RNA 260/2801.8说明有蛋白质、酚的污染，2.0说明RNA降解 1.蛋白质污染：确保不要吸入中间层及有机相。减少起始样品量，确保裂解完全、彻底。加入氯仿后首先要充分混匀，并且离心分层的离心力和时间要足够。如果所得RNA的OD260/OD280比值偏低，则用氯仿重新抽提一次，再沉淀，溶解。2.苯酚残留：确保不要吸入中间层及有机相。加入氯仿后首先要充分混匀，并且离心分层的 离心力和时间要足够。 3. RNA污染：建议楼主在提取的DNA中加入RNA酶，然后在测浓度，RNA会干扰DNA浓度，即使是试剂盒也不行的。 4.试验中的所有离心管和PCR管，研钵都要经过高温高压灭菌处理。 1.基因组DNA要结合电泳和测量OD两方面看，单看那个都不准确。 2.基因组DNA提取稍微有拖尾一点，是非常正常的 -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- RNA及DNA的提取,260/280测定用来鉴定DNA及RNA的纯度。260/280的值在1.8-2.0之间最好。RNA 260/2801.8说明有蛋白质、酚的污染，2.0说明RNA降解DNA 260/2801.8说明有蛋白质污染，2.0说明RNA污染。 =============================== OD值1.??朗伯——比尔（Lambert－beer）光吸收定律：A＝－lgT＝εb cA——吸光度，又称光密度“O.D”。T——透光度， T＝I / I。， I。——为照射到吸收池上的光强，I——为透过吸收池的光强。ε——摩尔吸光系数或克分子吸光系数（L?mol－1?cm－1）。b——样品光程（cm），通常使用1.0cm 的吸收地，b=1cm。C——样品浓度（mol/L）。由上式可以看出：吸光度A与物质的吸光系数“ε”和物质的浓度“C”成正比。2.??DNA和RNA的OD值2.1??原理嘌 呤碱和嘧啶碱具有共轭双键，使碱基、核苷、核苷酸和核酸在240~290nm的紫外波段有一强烈的吸收峰，因此核酸具有紫外吸收特性。DNA钠盐的紫外吸 收在260nm附近有最大吸收值（图3-25），在230nm处为吸收低谷，其吸光率（absorbance）以A260表示，A260是核酸的重要性 质，RNA钠盐的吸收曲线与DNA无明显区别，蛋白质在280nm处有最大的吸收峰，盐和小分子则集中在230nm处，对于纯的核酸溶液，测定A260， 即可利用核酸的比吸光系数计算溶液中核酸的量，核酸的比吸光系数是指浓度为1μg／mL的核酸水溶液在260nm处的吸光率，天然状态的双链DNA的比吸 光系数为0.020，变性DNA和RNA的比吸光系数为0.022。据朗波－比尔光吸收定律A＝-lgT＝εbc知，c＝A/εb，而b通常为1cm，所 以，通常以1OD值相当于50μg／mL双螺旋DNA，或40μg／mL单螺旋DNA（或RNA），或20μg／mL寡核苷酸计算。2.2??纯度DNA 和RNA的纯度可以通过测定260nm，230nm和280nm的紫外吸收值来测定，纯的DNA OD260／280在1.8-1.9，OD260／230应大于2.0，纯的RNA OD260／280在1.9-2.0，如果DNA比值高于1.8-1.9，可能有RNA没有去除干净，如果DNA比值小于1.8-1.9，可能含有酚或者 蛋白质（RNA中含有酚或者蛋白质比值也会降低），若OD260／230小于2.0说明有残存的盐或小分子杂质污染。2.3??浓度DNA 和RNA的量，据朗波－比尔光吸收定律A＝-lgT＝εbc知测量样品的浓