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低温胁迫下甜瓜幼苗叶片代谢产物含量变化的研究 项目编号：AH20141036405 作者：尚静静 导师：刘童光老师 目录 (一）项目背景及意义 （二）项目材料及实验方法 （三）项目实施过程 1.H2O2含量的测定及其变化 2.超氧阴离子自由基（O2.-）产生速率的测定及其变化 3.MDA含量的测定及其变化 4.可溶性糖含量的测定及其变化 5.可溶性蛋白质含量的测定 （四） 项目讨论 1.H2O2含量的变化及O2.-产生速率与幼苗耐低温的关系 2.低温胁迫对甜瓜幼苗叶片MDA含量的影响及MDA与抗寒性的关系 3.低温胁迫下可溶性糖含量变化与抗寒性的关系 4.可溶性蛋白含量的变化与抗寒性的关系 （五） 项目难题 （六） 项目小结 （七） 项目研究成果 （八） 项目经费使用情况 （一）1.项目背景 甜瓜（Cucumis melo L.）起源于热带非洲地区，属于葫芦科（Cucurbutaceae）甜瓜属（Cucumis）的一年生蔓性草本作物。甜瓜是世界十大水果之一，果实营养丰富，色香味俱佳，多食甜瓜，有利于人体心脏和脾脏以及肠道系统的活动，深受人们喜爱。我国是世界上最早栽培甜瓜的国家之一，也是世界 上甜瓜栽培面积最大、产量最高的国家之一。同时， 其在国际市场上属于高档果品，市场潜力很大。 （一）2.项目意义 甜瓜喜温耐热，植株生长温度以25℃～30℃为宜，在我省夏季甜瓜有大量种植，甜瓜14℃～45℃内均可生长，温度低于10℃时，会受到不同程度的冷害。近年来，随着我国设施园艺的快速发展，甜瓜保护地栽培日渐成为栽培、生产的主要方式。我国冬春季节甜瓜生产中经常遭遇低温冷害，长期低温对甜瓜幼苗生长甚是不利，使得低温冷害在反季节生产中问题变得日益突出。目前，在长江中下游地区，甜瓜的育苗期提前，最早可提前到元月份，定植期则可提前到2月份，在这段时间里外界温度较低，若碰到连续的阴雨天气，设施栽培内则会出现长时间低温(15℃)，将严重影响甜瓜的幼苗生长，引起其产量和品质下降。本项目选择安徽地区甜瓜主栽品种“早甜一号”为试材，其进行低温处理，常温下的叶片作为对照，测定叶片蔗糖、果糖、葡萄糖、淀粉等代谢产物含量的变化，探究低温胁迫下甜瓜叶片代谢产物含量变化的研究。冬春季节保护地栽培的低温环境严重影响甜瓜的品质、产量和经济效益，可见研究甜瓜的抗低温性对甜瓜反季节栽培和设施栽培的稳定发展，提高甜瓜的经济效益具有十分重要的意义。 （二）项目材料及实验方法 1. 供试材料 甜瓜品种选用“早甜一号”，种子由安徽省农科院园艺所蔬菜育种室提供。 2. 试验方法 选取籽粒饱满、大小一致的种子温汤浸种，55℃杀菌15min，30℃浸种8h，30℃培养箱中催芽。种子露白后播于5cm×5cm的塑料穴盘中。苗期常规管理。 待幼苗长到3叶1心时，移入光强为100μmol·m-2·s-1的SPX-250B-G型光照培养箱（上海博讯设备厂）内，每天光照12h。试验设处理T（昼/夜5℃/5℃）、对照CK(25℃/25℃)两个温度组合处理。处理需先在昼/夜温度15/10℃下预处理2d，再在5℃/5℃下处理8d。在低温处理第2d、4d、6d、8d，于9:00～10:00选取大小均匀植株的第二、三片真叶为材料测定各项指标，每个处理重复3次。 摘取后迅速称量、分装并用液氮速冻，然后保存于-80℃超低温冰箱，所有取样结束后在实验室内进行各项指标的测定。 （三）项目实施过程 超氧阴离子自由基（O2.-）产生速率的测定 H2O2含量的测定 可溶性糖含量的测定 MDA含量的测定 可溶性蛋白质含量的测定 1.1 H2O2含量的测定 参照Ferguson等[1]方法，利用丙酮抽取，Ti(IV)-PAR比色法测定。取1.5g保存于-80℃超低温冰箱的甜瓜叶片，剪碎后加入3ml预冷丙酮匀浆，4℃离心（10000r×10min），取1ml上清液，加3ml萃取剂（CCl4:CHCl3=3:1,体积比）混匀，再加5ml蒸馏水混匀，离心（4000r/min,1min），上层水相为H2O2待测液。各取1ml待测液，一份为空白，加入终浓度为3U·ml-1的过氧化氢酶（CAT），30℃保温10min；另一份待测液，加入等体积高温灭活的CAT酶液。两组分别加1ml0.2mol·L-1、pH7.8的磷酸缓冲液，再加1ml0.2mol·L-1的Ti(IV)-PAR显色剂，45℃水浴保温20min，静置1小时至室温，测508nm的吸光值，根据ΔA508值计算H2O2。 1.2 H2O2含量的变化 H2O2不是自由基，但由于它具有强