检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质概述.ppt

检测生物组织中的 糖类、脂肪、蛋白质 本节聚焦 生物组织中糖类、脂肪、蛋白质的鉴定原理 鉴定方法及注意事项 试验现象（颜色反应） 实验原理： 某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的颜色反应。如： 还原糖 + 斐林试剂→砖红色沉淀 脂肪 + 苏丹Ⅲ→橘黄色 蛋白质 + 双缩脲→紫色 淀粉 + 碘→蓝色 还原糖的鉴定 检测原理：还原糖+斐林试剂能产生成砖红色沉淀 选材：苹果或梨这种可溶性还原糖含量高、组织颜色较浅或近于 白色的植物。 试剂：斐林试剂（甲液和乙液的混合液） 甲液：0.1g/ml NaOH溶液 ；乙液：0.05g/ml CuSO4溶液 制备组织样液 颜色反应 向含有2ml的待测组织样中加入刚刚混合均匀的1ml斐林试剂50-65℃水浴加热2分钟 观察颜色变化 实验步骤 注意事项: 1：选材：还原糖含量高、组织颜色较浅或近于白色的植物。 2：斐林试剂现用现配,甲液和乙液等量混合均匀后加入 浅蓝色 棕色 砖红色 鉴定可溶性还原糖的实验材料 为什么不用植物的叶或西瓜与西红柿的果实？ 由于叶片中叶绿素的颜色较深，西瓜与西红柿的果实颜色为红色，对于鉴定时的颜色反应起着掩盖作用，导致实验现象不明显，因此，也不宜作实验材料。 本实验最理想的实验材料是含糖量较高的生物组织（或器官）,而且组织的颜色较浅，或近于白色的，如苹果和梨的果实。经试验比较，颜色反应的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。 蛋白质的鉴定 检测原理：蛋白质+双缩脲试剂---紫色 试剂：双缩脲试剂（A液和B液）。 A液：0.1g/ml NaOH溶液 ；B液：0.01g/ml CuSO4溶液 实验步骤： 选材：蛋清、豆浆、牛奶 制备组织样液 颜色反应 取样液 2ml注入试管，加入双缩脲试剂的A液1ml，摇匀，加入双缩脲试剂B液4滴摇匀。 观察颜色变化 无色变成紫色 注意事项： 1：双缩脲试剂的使用应先加入试剂A再加入试剂B 2：若用蛋清做为实验材料时，必须稀释10倍以上 斐林试剂与双缩脲试剂比较 斐林试剂 双缩脲试剂 甲液 乙液 A液 B液 成分 0.1g/ml NaOH溶液 0.05g/ml CuSO4溶液 0.1g/ml NaOH溶液 0.01g/ml CuSO4溶液 鉴定物质 添加顺序 反应条件 反应现象 还原糖 蛋白质 甲乙两液等量混匀后立即使用 先加入A液1ml，摇匀，再加入B液4滴，摇匀 水浴50-65 ℃加热 不需加热，摇匀即可 样液变砖红色 样液变紫色 脂肪的鉴定 检测原理：脂肪+苏丹III染液---------橘黄色 脂肪+苏丹IV染液----------红色 试剂：苏丹III试剂或苏丹Ⅳ试剂 实验步骤： 选材： 经浸泡的去皮的花生种子 切片: 选取最薄的几片切片置于洁净载玻片中央 染色: 滴苏丹III试剂2-3滴，染色3分钟(如用苏丹Ⅳ染液，染色1分钟） 去浮色： 用体积分数为50%的酒精溶液试剂1-2滴去薄片上的浮色 滴一滴蒸馏水盖上盖玻片，制成临时装片 制临时装片 镜检： 先低倍镜再转高倍镜 视野中有橘黄色(红色）颗粒 注意事项： 1、选用富含脂肪的种子，种子必须提前浸泡 3-4小时 2、染色后，一定要用体积分数50%的酒精洗去浮色 淀粉（多糖）的鉴定 实验原理：淀粉＋碘 蓝色 实验步骤：取样2ml加入2滴碘液，观察颜色变化 实验结果：碘与淀粉变蓝，说明样品中有淀粉存在。 热水浴 斐林试剂 试 剂 苏丹Ⅲ染液 碘 液 双缩脲试剂 淀 粉 还原糖 (如:葡萄糖) 蛋白质 脂 肪 待检有机物 颜色变化 橘黄色 紫色 砖红色沉淀 蓝色 + 小结 1、青苹果遇碘液显蓝色，熟苹果汁能与斐林试剂反应，产生砖红色沉淀，这说明（ ） A、青苹果中含淀粉不含糖类 B、熟苹果中只含糖类不含淀粉 C、苹果转熟时淀粉水解为还原糖 D、苹果转熟时单聚糖合成淀粉 2、下列健康人的4种液体样本中，能与双缩脲试剂发生紫色反应的是（ ） ①尿液 ②胃液 ③汗液 ④唾液 A、①③ B、①④ C、②③ D、②④ 3、在鉴定还原糖的实验中，加入斐林试剂时，必须要（ ） A、先加入斐林试剂甲液，后加入乙液 B、将斐林试剂的甲液和乙液等量混匀后再加 C、先加入斐林试剂乙液，后加入甲液 D、以上A、B、C三项操作方法都正确