实验5淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测摘要.pptVIP

第二部分 :酶的应用 2、溶液中的酶难回收，不能被再次利用，提高了生产成本； 直接使用酶缺点: 1、通常对强酸、强碱、高温和有机溶剂等条件敏感，易失活； 3、反应后混在产物中，影响产品质量。(难分离） 易失活、难回收、难分离 1、酶既能与反应物接触，又能与产物分离； 固定化酶 优点： 2、酶可以被反复利用。 易分离、能反复利用 将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂。 固定化酶: 固定化的方法： 共价偶连法(酶的基团与载体共价结合，从而被固定) 吸附法(吸附在载体上) 交联法(氨乙基纤维为载体用戊二醛交联再与酶蛋白氨基相联) 包埋法(将酶包埋在凝胶交联后的“格子”中) 将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂。 固定化酶: 固定化的方法: 吸附法、共价偶联法、交联法、包埋法等 实验6 α–淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测 实验目的: 1、制备固定化α–淀粉酶 2、进行淀粉水解的测定 用吸附法将a-淀粉酶固定在石英砂上，一定浓度的淀粉溶液经过固定化酶柱后,可使淀粉水解成糊精，用淀粉指示剂溶液测试，流出物呈红色表明水解产物糊精生成。 淀粉 α-淀粉酶 糊精 β淀粉酶 葡萄糖 糖化淀粉酶 麦芽糖 遇碘显蓝色 遇碘显红色 遇碘不显色 实验原理： 使用的是枯草杆菌的a-淀粉酶， 作用的最适温度为50~75℃； 最适PH为5.5~7.5 设备及用品: 材料: 1.a-淀粉酶的固定化:在烧杯中将5mgα-淀粉酶溶于4ml蒸馏水中.由于酶不纯,可能有些不溶物.再加入5g石英砂,不时搅拌,30min后装入1支下端接有气门心并用夹子封住的注射器中(石英砂体积约4ml).用10倍体积的蒸馏水洗涤此注射器以除去未吸附的游离淀粉酶,流速为1ml/min. 5ml塑料注射器50ml, 自行车用气门心及夹子, 注射器架试管,微量离心管3支,烧杯,滴管 反应柱 固定化酶 气门心 夹子 5ml注射器 α-淀粉酶的固定化: 设备及用品: 材料: 1.a-淀粉酶的固定化:将5mga-淀粉酶溶于4ml蒸馏水中..再加入5g石英砂,搅拌,30min后装入注射器中(石英砂体积约4ml).用10倍体积的蒸馏水洗涤此注射器以除去未吸附的游离淀粉酶,流速为1ml/min. 2.可溶性淀粉溶液:取50ml可溶性淀粉溶于100ml热水中,搅拌均匀. 3. 5mmol/L KI-I2溶液：称取0.127g碘和0.83g碘化钾。加蒸馏水100ml完全溶解后装入滴瓶中 5ml塑料注射器50ml, 自行车用气门心及夹子, 注射器架试管,微量离心管3支,烧杯,滴管 实验步骤: 1.将灌注了固定化酶的注射器放在注射器架上,用滴管滴加淀粉溶液,使淀粉溶液以0.3ml/min的流速过柱. 在流出5ml后接收0.5ml流出液,加入1~2滴KI-I2溶液,观察颜色.用水稀释1倍后再观察颜色. 滴加淀粉 实验步骤: 1.将灌注了固定化酶的注射器放在注射器架上,用滴管滴加淀粉溶液,使淀粉溶液以0.3ml/min的流速过柱.在流出5ml后接收0.5ml流出液,加入1~2滴KI-I2溶液,观察颜色.用水稀释1倍后再观察颜色. 反应柱 固定化酶 气门心 夹子 5ml注射器 淀粉 2.实验后,用10倍柱体积的蒸馏水洗涤此柱,放置在4℃冰箱中,几天后再重复上述实验,看是否有相同的结果. 课后练习：P40 1.如何证明洗涤固定化酶柱的流出液中没有淀粉酶? 2.耐高温的淀粉酶有哪些可能的用途? 在试管中加入1ml可溶性淀粉，再加几滴淀粉酶柱流出液，保温几分钟后用碘液检验。 如显蓝色，则流出液中没有淀粉酶了。 可以在高温下使淀粉水解快，而且酶不会因高温上而失活，所以可在一些需要高温加热同时又要水解淀粉的反应中使用。 1、研究认为，用固定化酶技术处理污染物是很有前途的。如将从大肠杆菌得到的磷酸三酯酶固定到尼龙膜上制成制剂，可以用来降解残留在土壤中的有机磷农药，与用微生物降解相比，其作用不需要适宜的（ ） A、温度 B、PH C、水分 D、营养 D 2、目前，日用化工厂大量生产的酶制剂，其中的酶大都来自 A、化学合成 B、动物体内 C、植物体内 D、微生物体内 D 3.酶的固定方法不包括( )。 A. 将酶吸附在固体表面上 B．将酶相互连接起来 C．将酶包埋在细微网格里 D．将酶制成固体酶制剂，如加酶洗衣粉中的酶 D 1、酶制剂的概念和种类 （一）酶制剂 含有酶的制品 ①定义： 多酶片、加酶洗衣粉中的蛋白酶和脂肪酶 ②种类： A、液体酶制剂 治